Resultado da pesquisa (960)
Termo utilizado na pesquisa STa
#81 - Indirect ELISA (iELISA) standardization for the diagnosis of bovine enzootic leukosis
Abstract in English:
Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious disease caused by bovine leukemia virus (BLV) that affects cattle worldwide. Agar gel immunodiffusion (AGID) was the reference test for EBL diagnosis for many years, but enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed higher sensitivity, was faster to perform, and resulted in an objective reading. However, the importation of ELISA kits is lengthy and expensive, and currently, no AGID kits are available in Brazil. The aim of this work was to standardize an indirect ELISA (iELISA) for EBL diagnosis using BLV antigens produced in Tadarida brasiliensis lung (Tb1Lu) cells, which are Bovine viral diarrhea virus (BVDV) free, unlike fetal lamb kidney (FLK) cells, currently used for this purpose. Following standardization, iELISA results were compared with those obtained by AGID and the commercial Chekit Leucose-Serum ELISA. Compared to AGID, iELISA had 94,44% sensitivity, 75.68% specificity, 79.10% positive predictive value (PPV) and 93.30% negative predictive value (NPV), with 84% concordance and a Kappa index of 0.699. Compared to the Chekit Leucose-Serum ELISA, iELISA showed 92.60% sensitivity, 87.09% specificity, 90.27% PPV and 90,00% NPV, with 90.27% concordance and a Kappa index of 0.801. Taking into account the high agreement with the traditional tests and the absence of non-specific reactions with BVDV, the developed assay could be used as diagnostic method to control EBL in Brazil.
Abstract in Portuguese:
A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa natural dos bovinos com distribuição mundial causada pelo “bovine leukemia virus” (BLV). A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi considerada por muitos anos o teste de eleição, porém ensaios imunoenzimáticos (ELISA) apresentam sensibilidade mais elevada e leitura mais rápida e objetiva. No entanto, a importação de kits de ELISA é um processo dispendioso e demorado, e atualmente não há kits de IDGA comercialmente disponíveis no Brasil. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi padronizar um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da LEB utilizando antígenos produzidos a partir do cultivo do BLV em linhagem celular Tadarida brasiliensis “lung” (Tb1Lu) livre de “bovine viral diarrhea virus” (BVDV), diferentemente do que acontece com as linhagens “fetal lamb kidney” (FLK) atualmente utilizadas na produção desses antígenos para uso em ensaios sorológicos. Após a padronização do iELISA, os resultados foram comparados com aqueles obtidos por IDGA e pelo ELISA comercial “Chekit Leucose-Serum”. Comparado ao IDGA, o iELISA apresentou 94,44% de sensibilidade, 75,68% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) de 79,1% e valor preditivo negativo (VPN) de 93,3%, com concordância entre os testes de 84% e o índice Kappa 0,699. Quando comparado ao ELISA “Chekit Leucose-Serum”, o iELISA apresentou sensibilidade de 92,6%, especificidade de 87,09%, VPP de 90,27% e VPN de 90%, com concordância de 90,27% e o índice Kappa 0,801. Portanto, devido à alta concordância com os testes tradicionais e ausência da ocorrência de reações inespecíficas com BVDV, o ensaio desenvolvido pode ser utilizado como ferramenta diagnóstica para o controle da LEB no Brasil.
#82 - Histomorphometric and immunohistochemical evaluation of the frontal cerebral cortex in diabetic rats after treatment with melatonin
Abstract in English:
The central nervous system is vulnerable to complications caused by diabetes. These complications lead to increased oxidative stress in the brain, resulting in damage to the cerebral cortex, among other regions. Insulin and hypoglycemic agents are still the most widely used treatments. However, current research with an experimental model of diabetes suggests the use of antioxidants, such as melatonin. Thus, we tested the hypothesis that exogenous melatonin may decrease or prevent the effects of diabetes in the frontal cortex of the rat brain. Fifty albino rats were allocated into five groups: GC = rats without diabetes induction, GD = diabetic rats induced by streptozotocin, GDM = streptozotocin-induced and melatonin-treated diabetic rats, GDI = diabetic rats induced by streptozotocin and treated with insulin, GDMI = diabetic rats induced by streptozotocin and treated with melatonin and insulin simultaneously. Diabetes was induced by intraperitoneal administration of streptozotocin (60mg/kg). Insulin (5U/day) was administered subcutaneously and melatonin (10mg/kg) by drinking water; both treatments last days after. We analyzed animals’ weight, the cytokines IL-6 and TNF-α, apoptosis, glycogen, and did morphometry and histopathology of the frontal cortex were analyzed. The results showed that the cerebral cortex of the diabetic animals presented axonal degeneration, reduced number of neurons in the cortex, reduced glycogen, increased IL-6 and TNF-α expression, high apoptotic index, and reduced animal weight and the brain. Treatment with melatonin associated or not with insulin prevented such effects. Thus, we conclude that melatonin associated with insulin may be an alternative for avoiding the impact of diabetes in the brain’s frontal cortex.
Abstract in Portuguese:
O sistema nervoso central é vulnerável a complicações originadas pelo diabetes estresse oxidativo no cérebro e resultando em lesões no córtex cerebral, dentre outras regiões. A insulina e hipoglicemiantes ainda são os tratamentos mais utilizados, entretanto, pesquisas atuais com modelo experimental do diabetes sugerem a utilização de antioxidantes como, por exemplo, a melatonina. Assim, testamos a hipótese de que a melatonina exógena pode diminuir ou prevenir os efeitos do diabetes no córtex frontal do cérebro de ratos. Foram utilizados 50 ratos albinos, divididos em 5 grupos: GC = ratos sem indução ao diabetes, GD = ratos induzidos ao diabetes pela estreptozotocina, GDM = ratos induzidos ao diabetes pela estreptozotocina e tratados com melatonina, GDI = ratos induzidos ao diabetes pela estreptozotocina e tratados com insulina, GDMI = ratos induzidos ao diabetes pela estreptozotocina e tratados com melatonina e insulina simultaneamente. O diabetes foi induzido pela administração intraperitoneal de estreptozotocina (60mg/kg). A insulina (5U/dia) foi administrada por via subcutânea e a melatonina (10mg/kg) pela água de beber. Ambos tratamentos foram realizados durante 30 dias após a indução. Foram analisados o peso dos animais, do cerebro, as citocinas IL-6 e TNF-α, apoptose, glicogênio, além da morfometria e histopatologia do córtex frontal. Os resultados mostraram que o córtex cerebral dos animais diabéticos apresentou degeneração axonal, redução do número de neurônios no córtex, redução do glicogênio, aumento da expressão do IL-6 e TNF-α, elevação do índice apoptótico, além da redução do peso dos animais e do cérebro. O tratamento com melatonina associada ou não a insulina preveniu tais efeitos. Assim, concluímos que a melatonina associada ou não a insulina pode ser uma alternativa na prevenção dos efeitos do diabetes no córtex frontal do cérebro.
#83 - Lesions of the sheep reproductive system found in a slaughterhouse in the state of Bahia, Brazil
Abstract in English:
The present study aimed to evaluate and diagnose pathologies of the reproductive system of slaughtered sheep in slaughterhouses in the state of Bahia since there are few data on the subject as well as it is important to note the diagnosis of these diseases to apply appropriate control and prophylaxis measures. The research was carried out in slaughterhouses in the state of Bahia according to the “Serviço de Inspeção Federal” and “Serviço de Inspeção Estadual” for sheep slaughter. From July 2018 to February 2019, visits and monitoring of 1,072 slaughtered sheep were carried out. The animals came from 22 municipalities in the state of Bahia, aged from six to 18 months. During slaughter, the sheep reproductive systems were sectioned for evisceration and lesion collection. Additionally, epidemiological surveys related to origin, age, and race were obtained. For bacteriological examination, collections were performed with sterile scalpel slides and swabs in Stuart medium sterile tubes and refrigerated in a thermal box. For histopathological analysis, fragments were fixed in 10% formaldehyde and routinely processed for histology, stained with Hematoxylin and Eosin (HE). A study of the sheep’s main pathological changes in slaughterhouses in the state of Bahia was carried out, in which 1.072 genital systems were evaluated, and 211 alterations were identified. The most affected reproductive organs were the ovaries (65.3%), followed by the uterus (29.4%) and uterine tubes (5.3%). In the ovaries, the most frequent lesion was a follicular cyst (34.1%); in the fallopian tubes, the cysts represented 3.3% of the lesions, and in the womb, endometritis was observed in 9% of the animals. Other pathologies identified in the ovaries were: luteinized cyst (2.3%); cystic granulosa cell tumor (0.5%); benign lesion (0.5%); agenesis unilateral (0.5%), in addition to other changes of little clinical significance, such as corpus luteum cysts (11.8%) and paraovarian cysts (15.6%). In the fallopian tubes, hydrosalpinx was observed (1%), as well as adenoma (0.5%), agenesis (0.5%), and cysts (3.3%). Uterine lesions included hydrometra (2.3%); Cystic Endometrial Hyperplasia (CEH), abscess, and pyometra (1.4% each); adenomyosis, womb sera petechiae, and total segmental aplasia (1% each); two pregnant uterus, in early pregnancy, presented pyometra (0.9%), however, no change was observed in the fetuses; and uterine polyp (0.5%). Ectopic pregnancy with fetal maceration (0.5%) was observed; vaginitis occurred in 0.5% of the animals, and endometrial melanosis in 8.5%. The high incidence of follicular cysts and endometritis are characterized as diseases that reduce the reproductive efficiency in herds, causing infertility and economic losses in production.
Abstract in Portuguese:
O objetivo do presente trabalho foi avaliar e diagnosticar alterações do sistema reprodutor de ovelhas abatidas em abatedouros frigoríficos no estado da Bahia. A pesquisa foi realizada em abatedouros frigoríficos do estado da Bahia com Serviços de Inspeção Federal e Estadual no abate de ovinos. No período de julho de 2018 a fevereiro de 2019 foram realizadas visitas e acompanhamento do abate de 1.072 ovelhas. Os animais eram provenientes de 22 municípios do estado da Bahia, com idade entre 6 a 18 meses. Durante o abate, na evisceração foram seccionados os sistemas reprodutores das ovelhas para avaliação e coleta das lesões. Adicionalmente foram obtidos inquéritos epidemiológicos relacionados à procedência, idade e raça. Para o exame bacteriológico, as coletas foram realizadas com lâminas de bisturi estéreis e swabs em tubos estéreis com meio Stuart e refrigeradas em caixa térmica. Para análise histopatológica, os fragmentos foram fixados em formol a 10% e processados de forma rotineira para histologia e corados pela hematoxilina e eosina (HE). Entre 1.072 sistemas genitais avaliados, identificou-se 211 alterações. Os órgãos do sistema reprodutor mais acometidos foram os ovários (65,3%), útero (29,4%) e tubas uterinas (5,3%). Nos ovários, a lesão mais frequente foi o cisto folicular (34,1%); no útero a endometrite (9%) e nas tubas uterinas, os cistos representaram (3,3%). Outras lesões identificadas nos ovários foram: cisto luteinizado (2,3%); tumor de células da granulosa (0,5%); adenoma (0,5%); agenesia unilateral (0,5%), além de outras alterações de pouco significado clínico, como cistos paraovarianos (15,6%) e corpo lúteo cístico (11,8%). Nas tubas uterinas observou-se, além dos cistos tubo-ovarianos (3,3%), hidrossalpinge (1%), adenoma (0,5%) e agenesia (0,5%). As lesões uterinas foram endometrite (9%), hidrometra (2,3%); hiperplasia endometrial cística, abscesso e piometra (1,4% cada); adenomiose, petéquias na serosa do útero e aplasia segmentar (1% cada); dois úteros gravídicos, em início de gestação, apresentaram piometra (0,9%), porém os fetos não apresentaram alterações; e pólipo uterino (0,5%). Observou-se uma gestação ectópica com maceração fetal (0,5%); a vaginite ocorreu em 0,5%, e melanose endometrial em 8,5%. Destaca-se a elevada incidência de cistos foliculares e endometrite que são doenças que reduzem a eficiência reprodutiva dos rebanhos, provocando infertilidade e perdas econômicas na produção.
#84 - Welfare during pre-slaughter handling and carcass lesions of beef cattle submitted to different loading densities
Abstract in English:
Inadequate pre-slaughter handling conditions can compromise animal welfare and productivity. This study aimed to evaluate the animal welfare (AW) indexes during pre-slaughter handling and quantify the carcass lesions of beef cattle submitted to different loading densities. A total of 270 Nellore cattle, at 30 months of age, from three farms were used in the study. Each farm presented a different loading density: higher density
(500kg/m2), intermediate density (450kg/m2), and lower density (420kg/m2). Three shipments of cattle from each farm with 30 animals each were used in the AW analysis. Ten animals from each shipment were considered for quantification of carcass bruises. The AW indexes were classified according to the five-freedom criterion (physiological, environmental, sanitary, behavioral, and psychological). After slaughter, the carcasses were inspected in the routine line and evaluated for the presence of lesions. Statistically significant differences (p<0.001) were found for all variables studied as a function of AW and bruises. The best AW index and the lowest mean weight of lesions were found at the loading density of 450kg/m2. The highest carcass weight was observed at the loading density of 500kg/m2. Lesions were found in 100% of the animals at the loading densities of 500 and 420kg/m2. In conclusion, the best AW indexes and the smallest occurrence of bruises were verified at the loading density of 450kg/m2. This study confirmed the importance of adequate pre-slaughter handling to ensure cattle welfare and, consequently, greater profitability for producers and slaughterhouses.
Abstract in Portuguese:
Condições de manejo pré-abate inadequadas podem comprometer o bem-estar e a produtividade animal. O objetivo deste estudo foi avaliar os índices de bem-estar animal (BEA) durante o manejo pré-abate e quantificar as lesões em carcaça de bovinos submetidos às diferentes densidades de carregamento. Para isto, foram utilizados 270 bovinos Nelore, aos 30 meses de idade, provenientes de três fazendas. Cada fazenda apresentou diferente densidade de carregamento: maior densidade (500kg/m2), densidade intermediária (450kg/m2) e menor densidade (420kg/m2). Foram realizados três carregamentos de cada fazenda, compostos por 30 animais cada. Para análise do BEA e quantificação de lesões nas carcaças bovinas foram considerados 10 animais de cada carregamento. Os índices de BEA foram classificados segundo o critério das cinco liberdades (fisiológica, ambiental, sanitária, comportamental e psicológica). Após o abate, as carcaças foram inspecionadas na linha de rotina e avaliadas quanto à presença de lesões. Foram encontradas diferenças significativas (P<0,001) para todas as variáveis estudadas em função do BEA e das lesões. O melhor índice de bem-estar e o menor peso médio de lesão foi encontrado na densidade de carregamento de
450kg/m2. O maior peso da carcaça foi encontrado na densidade de carregamento de 500kg/m2. Em 100% dos animais nas densidades de carregamento de 500 e 420kg/m2 foram encontradas lesões. Pode-se concluir que a densidade de carregamento de bovino de 450kg/m2 obteve os melhores índices de bem-estar e menor ocorrência de lesões. Este estudo confirma a importância do manejo pré-abate adequado na garantia do bem-estar aos bovinos e, consequentemente, na maior rentabilidade ao produtor e ao frigorífico.
#85 - Physiological and biochemical responses and hydration status in equines after two barrel racing courses
Abstract in English:
Studies on biochemical constituents and hydration of horses in training or competitions are essential for the knowledge of their adaptive physiological and metabolic responses to the type of exercise inherent to the sport. The present research evaluated the effects of exercise on hydric status and physiologic and biochemical profiles in Quarter Horses during a barrel race training session. The design consisted of three evaluation times (T): at rest, before the start of physical activity (T0); immediately after a 10-minute warm-up trot and then running the barrel race courses twice with a 10-minute interval (T1); and after one hour’s rest after the second course (T2). The parameters analyzed were: heart rate (HR), respiratory rate (RR), body temperature (BT) and mucose color; the capillary refill time (CRT), packed cell volume (PCV), total plasma proteins (TPP), serum creatinine (CRE) and blood urea nitrogen (BUN) were evaluated and used to infer water status; plasma osmolarity (Osm) was measured; the electrolytes sodium (Na), potassium (K), chloride (Cl), total calcium (tCa), total magnesium (tMg) and phosphorus (P), plasma glucose (Glu) and lactate (Lac) and the muscle enzymes creattine kinase (CK) and aspartate aminotransferase (AST) completed the evaluated parameters. The data for the variables studied were submitted to ANOVA and the Tukey test at 5% probability. After exercise (in T1), HR, RR, BT, PCV, TPP, Glu, Lac, Cre increased (P<0.05), there was also increase in phosphorus and decrease in K (P<0.05), but there was no hypophosphatemia and hipokalemia, respectively. After rest (in T2), only glucose returned to baseline levels (T0) and, with lower mean values, HR, RR, BT, PCV, K and Lac did not return to baseline levels (T0), while P decreased (P<0.05). Osm, BUN, Na, Cl, tCa, tMg, CK and AST did not change between times (P>0.05). It was concluded that the maximum intensity exercise performed on two barrel race courses caused mild hemoconcentration, did not changed plasma osmolality or concentrations of important electrolytes and muscle enzymes of horses, but caused hyperlactatemia without the plasma lactate concentrations being fully recomposed after resting.
Abstract in Portuguese:
O perfil bioquímico e o status de hidratação de equinos em treinamentos ou competições fornecem dados importantes das suas respostas fisiológicas e metabólicas em relação ao tipo específico de exercício em uma modalidade esportiva. No presente estudo, o status hídrico e o perfil fisiológico-bioquímico de equinos foram avaliados durante treinamento de três tambores, em três tempos (T): em repouso, antes do início da atividade física (T0); imediatamente após 10 minutos de aquecimento ao trote seguido de duas corridas na pista de tambor, intervaladas em 10 minutos (T1); e após uma hora de descanso do segundo percurso (T2). Os parâmetros avaliados foram: frequência cardíaca (FC), frequência respiratória (FR), temperatura corporal (BT) e cor da mucosa; o tempo de enchimento capilar (TEC), volume globular ou hematócrito (VG), proteínas plasmáticas totais (TPP), creatinina sérica (Cre) e a ureia (Ure) foram avaliados e utilizados para inferir o estado hídrico dos animais; a osmolaridade plasmática (Osm) também foi mensurada; as concentrações dos eletrólitos sódio (Na), potássio (K), cloreto (Cl), cálcio total (tCa), magnésio total (tMg) e fósforo (P), e das enzimas musculares foram mensurados no soro, e as de glicose (Gli) e lactato (Lac) no plasma. Os dados das variáveis estudadas foram submetidos à ANOVA e ao teste de Tukey a 5% de probabilidade. Após o exercício (T1), a FC, FR, TC, VG, TPP, Gli, Lac, Cre aumentaram. O P também aumentou (P<0,05), mas não alcançou nível de hiperfosfatemia, e o K diminuiu (P<0,05), mas não ao nível de hipocalemia. Embora com médias menores, a FC, FR, TC, VG, K e o Lac não retornaram aos níveis basais (T0) após o repouso (T2), apenas a Gli, enquanto o fósforo diminuiu (P<0,05). A Osm, ureia, Na, Cl, tCa, tMg, CK e AST não variaram entre os tempos (P>0,05). Concluiu-se que, o exercício de intensidade máxima realizado em dois percursos de três tambores causou leve hemoconcentração, não alterou a osmolaridade plasmática nem importantes concentrações de eletrólitos e de enzimas musculares dos equinos, porém, causou hiperlactatemia, sem completa recomposição da concentração do lactato após uma hora de descanso.
#86 - Clinical-pathological and immunohistochemical evaluations of cardiac lesions in cats with chronic kidney disease
Abstract in English:
Chronic kidney disease (CKD) is characterized by irreversible morphostructural lesions that can progressively evolve to chronic renal insufficiency and kidney failure. It is known that the heart and kidneys are closely related, and that communication between these organs occurs through a variety of pathways; subtle physiological changes in one of them are compensated by the other. Histopathological cardiac evaluation through routine staining presents a limitation to identify specific or discreet lesions in the cardiomyocytes. This study aimed to evaluate serum troponin levels in cats with CKD, associated with clinical and pathological findings, as well as to correlate the morphostructural cardiac lesions to determine their distribution through macroscopic and histological assessments and anti-cardiac troponin C (cTnC) immunohistochemistry (IHC). To this end, 20 cats (18 diagnosed with CKD and two controls) were selected. Anti-human cTnC IHC was conducted after necropsy and separation in eight regions of each collected heart. Heart fragments from two cats without CKD were used as controls. The anti-human cTnC antibody is useful in detecting cardiac lesions and has shown decreased expression in cardiomyocytes of cats with CKD. Serum troponin was above the reference values in 11/18 (61.11%) animals and decreased expression for the cTnC antibody was observed in individual cardiomyocytes in 9/18 (50%) animals. It was verified that the number of regions with decreased expression for the cTnC antibody in cardiomyocytes is significantly correlated with serum troponin. The anti-human cTnC antibody has been found effective in detecting cardiac lesions and has shown decreased expression in the cardiomyocytes of cats with CKD. Correlation was observed between increased serum cTnI and loss of immunoreactivity at anti-cTnC antibody IHC in cats with CKD, which proves damage to cardiomyocytes secondary to kidney disease.
Abstract in Portuguese:
A doença renal crônica (DRC) é caracterizada por lesões morfoestruturais irreversíveis, que podem evoluir progressivamente para insuficiência renal crônica e falência renal. Sabe-se que o coração e os rins mantêm estreita relação e a comunicação entre esses órgãos ocorre por uma variedade de vias; alterações fisiológicas sutis em um desses órgãos são compensadas pelo outro. A avaliação histopatológica cardíaca mediante a colorações rotineiras são limitadas para identificar lesões específicas ou discretas em cardiomiócitos. O presente trabalho teve como objetivos avaliar os níveis séricos de troponina em gatos com DRC, associados aos achados clínico-patológicos, bem como correlacionar as lesões cardíacas morfoestruturais, a fim de determinar a distribuição destas, por meio da avaliação macroscópica, histológica e imuno-histoquímica com anti-cTnC. Neste estudo foram selecionados 20 gatos (18 diagnosticados com DRC e 2 animais controle). Para a aplicação da técnica de imuno-histoquímica anti-troponina C humana, necropsias foram realizadas e cada coração coletado separadamente em 8 regiões. Fragmentos do coração de 2 gatos sem lesão cardíaca foram utilizados como controle. O anticorpo anti-TnC humano é útil na detecção de lesões cardíacas e apresentou expressão diminuída em cardiomiócitos de gatos com DRC. Em 11/18 animais (61,11%) a troponina sérica encontrava-se acima dos valores de referência e foram observadas diminuição da expressão para anticorpo-cTnC em cardiomiócitos individuais em 9/18 (50%). Notou-se que o número de regiões com diminuição da expressão para anticorpo-cTnC em cardiomiócitos está significativamente correlacionado com a troponina sérica. O anticorpo anti-TnC humano se mostrou eficaz para detectar lesões cardíacas e demonstrou diminuição da expressão nos cardiomiócitos de gatos com DRC. Houve correlação entre o aumento da CTnI sérica e perda da imunorretividade na avaliação imuno-histoquímica com anticorpo anti-TnC em gatos com DRC o que comprova danos em cardiomiócitos secundários a doença renal.
#87 - Epigenetic characterization of the H19/IGF2 locus in calf clones placenta
Abstract in English:
Somatic Cell Nuclear Transfer (SCNT-Cloning) is a promising technique in many areas and is based on genetically identical individuals. However, its efficiency is low. Studies suggest that the leading cause is inadequate epigenetic reprogramming. This study aimed to characterize the methylation pattern of the exon 10 regions of the IGF2 gene and the Imprinting Control Region (ICR) of the H19 gene in the placenta of cloned calves. For this study, female and male cloned calves presenting different phenotypes were used. Genomic DNA from these animals’ placenta was isolated, then treated with sodium bisulfite and amplified to the ICR/H19 and IGF2 loci. PCR products were cloned into competent bacteria and finally sequenced. A significant difference was found between controls and clones with healthy phenotypes for the ICR/H19 region. In this region, controls showed a hemimethylated pattern, as predicted in the literature due to this region has an imprinted control, while clones were showed less methylated. For the IGF2, no significant differences were found between controls and clones. These results suggest that different genomic regions in the genome may be independently reprogrammed and that failures in reprogramming the DNA methylation patterns of imprinted genes may be one of the causes of the low efficiency of SCNT.
Abstract in Portuguese:
A Transferência Nuclear de Células Somáticas (TNCS-Clonagem) é uma técnica promissora em várias áreas, e se baseia na produção de indivíduos geneticamente idênticos. No entanto, sua eficiência é baixa. Estudos sugerem que a principal causa seja uma reprogramação epigenética inadequada. O objetivo desse trabalho é caracterizar o padrão de metilação da região éxon 10 do gene IGF2 e da Região Controladora de Imprinting (ICR) do gene H19 na placenta de bezerros clonados. Para a execução do trabalho foram selecionados clones bovinos fêmeas e machos, apresentando diferentes fenótipos. O DNA da placenta desses animais foi extraído, e em seguida foi tratado com bissulfito de sódio e amplificado para os loci ICR/H19 e IGF2. Os produtos da PCR foram clonados em bactérias competentes e, por fim, sequenciados. Foi encontrada uma diferença significativa entre os controles e os clones com fenótipos saudáveis para a região da ICR/H19. Nesta região, os controles tiveram um padrão hemimetilado, como previsto pela literatura, devido essa região ser imprinted. Enquanto os clones encontravam-se menos metilados. Para a região do éxon 10 do IGF2, não foi encontrada diferença significativa entre controles e clones. Estes resultados sugerem que as diferentes regiões do genoma podem se reprogramar independente umas das outras e que falhas na reprogramação do padrão de metilação do DNA de genes imprinted podem ser uma das causas da baixa eficiência da TNCS.
#88 - Isolation and genotyping of Mycobacterium bovis in suggestive lesions of tuberculosis in cattle slaughtered in the state of Ceará, Brazil
Abstract in English:
Bovine tuberculosis (BTB) is a zoonosis caused by the bacterium Mycobacterium bovis, which induces the development of nodular and granulomatous lesions in various animal tissues. The recognition of these suggestive gross lesions during postmortem sanitary inspection in slaughterhouses provides a presumptive diagnosis, which requires the use of complementary tests to confirm the disease. This study aimed to verify the occurrence of BTB in cattle slaughtered in slaughterhouses in the state of Ceará, Brazil, using bacteriological and molecular methods. To this end, suggestive lesions were analyzed on carcasses condemned by the “Serviço de Inspeção Estadual” (SIE). The samples were submitted to microbiological analysis using culture media and specific staining followed by spoligotyping molecular technique for identification and genotyping of the mycobacteria. Occurrence of lesions suggestive of BTB was verified in bovine carcasses (0.071%) from different municipalities of the state. These lesions were located mainly in the lung (95.12%), lymph nodes (58.53%), and liver (36.58%). Microbiological culture showed bacterial isolation (17.94%), with the growth of colonies showing morphological and tannic characteristics belonging to genus Mycobacterium spp. Genetic polymorphism analysis identified M. bovis in all isolates, which were discriminated into six spoligotypes (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870, and SB0852). These profiles have been described in Brazil and several areas of the world, except for profiles SB1064 and SB0852, which were described in the country for the first time. The results show that the association of the diagnostic methods used was the basis for the first study on identification of mycobacteria found in the state, which may provide a database for the epidemiological study of BTB in the state of Ceará.
Abstract in Portuguese:
A tuberculose bovina (TB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, o qual induz ao desenvolvimento de lesões nodulares e granulomatosas em vários tecidos do animal. O reconhecimento dessas lesões macroscópicas sugestivas durante a inspeção sanitária post mortem em matadouros fornece um diagnóstico presuntivo, sendo necessário a utilização de testes complementares para confirmação da doença. O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência da TB em animais abatidos em matadouros-frigoríficos no estado do Ceará através da utilização de métodos bacteriológicos e moleculares. Para tanto, foram analisadas lesões sugestivas de TB em carcaças condenadas pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE). As amostras foram submetidas à análise microbiológica, utilizando meios de cultivo e de coloração específicos, seguida pela técnica molecular spoligotyping para identificação e tipificação genética da micobactéria. Verificou-se a ocorrência de lesões sugestivas de TB em carcaças bovinas (0,071%) oriundas de diferentes municípios do estado do Ceará. Essas lesões estavam localizadas principalmente no pulmão (95,12%), linfonodos (58,53%) e fígado (36,58%). O cultivo microbiológico obteve isolamento bacteriano (17,94%), com o crescimento de colônias apresentando características morfológicas e tintoriais pertencentes ao gênero Mycobacterium spp. A análise do polimorfismo genético identificou a presença de M. bovis em todos os isolados, que foram discriminados em seis espoligotipos (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870 e SB0852), descritos no Brasil e em diversas áreas do mundo, exceto os perfis SB1064 e SB0852 que foram descritos pela primeira vez no país. Os resultados obtidos demonstram que a associação dos métodos diagnósticos utilizados foram a base do primeiro estudo de identificação das micobactérias encontradas no estado do Ceará, o que pode contribuir para a criação de um banco de dados para o estudo epidemiológico da TB no estado.
#89 - Investigation of Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica in pig carcasses in Southern Brazil
Abstract in English:
The intensification of pig production and advances in the sanitary control of herds profoundly changed the profile of risk attributed to pork consumption. In the actual scenario, most microorganisms related to macroscopic lesions observed in the post mortem inspection are not transmitted by food, while foodborne bacteria of importance to consumer health do not cause macroscopic lesions. In Brazil, the “Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento” requested a scientific opinion on the prioritizing of pathogens potentially transmitted by unprocessed pork. After conducting a qualitative risk assessment, only Salmonella enterica was classified as of high risk to consumers. The present study was part of the validation step of the risk assessment and aimed to investigate the frequency of S. enterica, Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes and hygienic-sanitary indicators in pig carcasses of pigs rose under intensive production and slaughtered under the Federal Inspection System in three slaughterhouses located in Southern Brazil. Additionally, the antimicrobial resistance profile of the isolated pathogens was also investigated. A total of 378 carcasses were sampled by superficial sponges before the chilling step in three slaughterhouses. Samples were investigated for the presence of the three aforementioned pathogens and subjected to enumeration of Colony Formation Units (log CFU.cm-1) of total aerobic mesophiles (TAM) and Enterobacteriaceae. Salmonella strains were tested by disc diffusion test for resistance to eleven antimicrobials. There were significantly statistical differences (p<0.0001) on the median counts of both indicators between the slaughterhouses. The median of TAM was very close for Slaughterhouses A and B: 1.573 log CFU.cm-1 and 1.6014 log CFU.cm-1, respectively. While in Slaughterhouse C, a higher TAM median was detected (2.216 log CFU.cm-1). A similar profile was observed regarding to Enterobacteriaceae, and medians were calculated as follow: -0.426 log CFU.cm-1 in Slaughterhouse A; 0.2163 log CFU.cm-1 in B; and 0.633 log CFU.cm-1 in C. Regarding the pathogens investigated, L. monocytogenes was not detected and only one carcass from Slaughterhouse C was positive for Y. enterocolitica. Thus, the results suggest a very low prevalence of L. monocytogenes and Y. enterocolitica in the sampled population. A total of 65 (17.2%) carcasses were positive for S. enterica, with a difference in frequencies between slaughterhouses and slaughter days. The prevalence of Salmonella positive carcasses was higher in the Slaughterhouse C (25.4%; CI 95% 19-32%) in comparison with A (9.5%; CI 95% 9-14%) and B (18.3%; CI 95% 12-24%). There was no significantly statistical association between Enterobacteriaceae counts and Salmonella isolation on carcass surface (p=0.69). The slaughtering day, nested within the slaughterhouse, explains 31.3% of Salmonella prevalence variability. S. Typhimurium (38.1%) was the most prevalent, followed by S. Infantis (30.1%). Among the 61 Salmonella strains tested for resistance to antimicrobials, 18 (31.6%) were full-susceptible. No strain displayed resistance to azithromycin, ceftazidime, cefotaxime and meropenem. The highest resistance frequency was displayed to tetracycline (54.1%), followed by ampicillin (50.82%), nalidixic acid (42.62%) and chloramphenicol (42.62). Multi-resistance was detected in 52.54% of the, strains. In conclusion, S. enterica is more prevalent in pre-chill pig carcasses than Y. enterocolitica and L. monocytogenes and thus should be prioritized in monitoring and control programs at slaughter. Salmonella serovars varied among slaughterhouses and present significant differences in their resistance to antimicrobials. Slaughterhouses that present higher medians of TAM or Enterobacteriaceae in a monitoring period may have higher S. enterica prevalences as well. However, there is a high variation of S. enterica prevalence among slaughter days, which cannot be always related to the hygienic indicators counts observed on a given day.
Abstract in Portuguese:
A intensificação da produção de suínos e os avanços no controle sanitário dos rebanhos alterou de forma importante o perfil de risco do consumo de carne suína. No cenário atual, a maioria dos microrganismos causadores de lesões macroscópicas detectáveis na inspeção post mortem não são transmissíveis por alimentos, enquanto bactérias de importância como causadoras de doenças transmitidas por alimentos não causam lesões macroscópicas. No Brasil, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento solicitou uma opinião científica sobre a priorização de patógenos potencialmente transmitidos pela carne suína in natura. Após conduzir uma avaliação de risco qualitativa, apenas Salmonella enterica foi classificada como de alto risco para o consumidor. O presente estudo foi parte da etapa de validação da avaliação de risco e objetivou: investigar a frequência de S. enterica, Yersinia enterocolitica e Listeria. monocytogenes; e enumerar indicadores higiênico-sanitários em carcaças de suínos abatidos sob inspeção federal em frigoríficos dedicados ao abate de suínos sob sistema intensivo de criação no sul do Brasil. Além disso, o perfil de resistência a antimicrobianos dos patógenos isolados foi investigado. A superfície de um total de 378 carcaças foi amostrada por esponjas, na etapa de pré-resfriamento em três matadouros frigoríficos (A, B, C). As amostras foram investigadas quanto à presença dos três patógenos acima mencionados e quanto à enumeração de Unidades Formadoras de Colônia (log UFC.cm-1) de mesófilos aeróbios totais (MAT) e Enterobacteriaceae. As cepas isoladas de Salmonella foram testadas quanto à resistência a onze antimicrobianos pela técnica de disco difusão. As medianas de contagem de ambos os indicadores apresentaram diferença significativa (p<0,0001) entre matadouros-frigoríficos. A mediana de MAT foi bastante próxima para A e B (1,573 log UFC.cm-1 e 1,6014 log UFC.cm-1, respectivamente), enquanto em C uma mediana de MAT mais elevada foi determinada (2,216 log CFU.cm-1). Um perfil semelhante foi observado em relação a Enterobacteriaceae, sendo as medianas calculadas para A, B e C, respectivamente: -0,426 log CFU.cm-1; 0,2163 log UFC.cm-1; e 0,633 log UFC.cm-1. Em relação aos patógenos investigados, L. monocytogenes não foi detectada e apenas uma carcaça, do Matadouro C, foi positiva para Y. enterocolitica. Portanto, os resultados sugerem uma prevalência muito baixa desses patógenos na população amostrada. Em um total de 65 (17,2%) carcaças houve isolamento de S. enterica, com diferença nas frequências observadas entre matadouros e dias de abate. A prevalência de carcaças positivas para S. enterica foi maior no Matadouro C (25,4%; IC95% 19-32%) em comparação com A (9,5%; IC95% 9-14%) e B (18,3%; IC95% 12-24%). Não houve associação estatística entre o número de Enterobacteriaceae e o isolamento de S. enterica na superfície das carcaças (p=0,69). O dia de abate agrupado por frigorífico explica 31,3% da variação na prevalência de Salmonella. O sorovar mais frequente de S. enterica foi Typhimurium (38,1%) seguido de S. Infantis (30,1%). Entre as 61 cepas de S. enterica testadas quanto à resistência a antimicrobianos, 18 (31,6%) foram totalmente suscetíveis aos antimicrobianos testados. Nenhuma cepa apresentou resistência a azitromicina, ceftazidima, cefotaxima e meropenem. As maiores frequências de resistência foram demonstradas contra tetraciclina (54,1%), ampicilina (50,8%), ácido nalidíxico (42,62%) e cloranfenicol (42,62%). Em 52,54% das cepas foi detectada multi-resistência. Em conclusão, S. enterica é mais prevalente em carcaças suínas no pré-resfriamento do que Y. enterocolitica e L. monocytogenes. Portanto, S. enterica deve ser priorizada em programas de monitoramento e controle ao abate. Os sorovares de Salmonella variam entre matadouros e apresentam diferenças significativas na resistência a antimicrobianos. Matadouros de suínos que apresentam medianas de MAT e Enterobacteriaceae num período de monitoramento podem apresentar também prevalências mais de altas de presença de S. enterica. Entretanto, há uma alta variabilidade na frequência de S. enterica entre dias de abate, e nem sempre há relação entre essa frequência e a contagem de indicadores higiênico-sanitários determinados num determinado dia.
#90 - Antimicrobial resistance evaluation of bacteria isolated from infections in small animals in the Umuarama region, Paraná
Abstract in English:
Bacterial resistance is shown to be an inevitable side effect due to the excessive use of antibiotics, becoming a significant concern worldwide. Knowledge of regional bacterial resistance profiles enables the development of site-specific infection control practices, making conscious and moderate use of commercially available antibiotics. The aim of this study was the retrospective evaluation of the antimicrobial resistance profile of bacteria isolated from companion animal infections in the region of Umuarama/PR, from 2013 to 2017. This research was performed by analyzing the database belonging to the “Laboratório de Microbiologia Animal” at the “Universidade Estadual de Maringá” (UEM). Staphylococcus spp. represented 45.53% of the bacteria isolated from clinical infections in small animals in the period and place evaluated, followed by enterobacteria (34.04%), non-fermenting Gram-negative bacilli (NFGNB, 11.06%) and Streptococcus/Enterococcus (9.36%). A high number of antimicrobial resistance to antibiotics used in veterinary medicine was found. The lowest resistances associated with the best impact factor values were found for aminoglycosides, especially amikacin, chloramphenicol, and fluoroquinolones (norfloxacin and ciprofloxacin). Intermediate results were found for sulbactam-associated ampicillin, ceftriaxone, amoxicillin-clavulanic acid, and enrofloxacin. According to the number of resistant antimicrobial drugs, 64.26% (151/235) of the isolates were classified as multidrug-resistant, being 15.32% extensively resistant. Considering the resistance to antimicrobial classes, 68.94% (162/235) of the isolates were classified as multiresistant, being 19.15% extensively resistant. No bacterial strains were characterized as pan-resistant, but ten bacteria were resistant to all classes tested, with isolated susceptibility to certain drugs. Through the evaluation of resistance profiles found in the period and place studied and relevant literature, it is clear that there is a growing increase in the number of multiresistant bacteria among domestic animals which characterizes a serious risk to public health. The therapeutic arsenal is becoming increasingly diminished, and there is more difficulty in empirical drug selection, making antimicrobial susceptibility testing essential for more specific selection in antimicrobial therapy. Educational measures on the conscious use of antibiotics, infection control, and prevention of local specific zoonoses need to be instituted for the knowledge of health professionals and general access of the population.
Abstract in Portuguese:
A resistência bacteriana, mostra-se como um efeito colateral inevitável pelo excessivo uso de antibióticos, tornando-se alvo de grande preocupação mundial. O conhecimento dos perfis de resistência bacteriana regionais possibilita o desenvolvimento de práticas de controle de infecções específicas para cada localidade, fazendo uso consciente e moderado dos antibióticos disponíveis no mercado. O objetivo deste estudo foi a avaliação retrospectiva do perfil de resistência antimicrobiana de bactérias isoladas de infecções de animais de companhia na região de Umuarama/PR, no período de 2013 a 2017. Esta pesquisa foi realizada por meio da análise do banco de dados pertencente ao Laboratório de Microbiologia Animal da Universidade Estadual de Maringá (UEM). Os Staphylococcus spp. representaram 45,53% das bactérias isoladas de infecções clínicas em pequenos animais no período e local avaliado, seguido por enterobactérias (34,04%), bacilos Gram-negativos não fermentados (BGNNF, 11,06%) e Streptococcus/Enterococcus (9,36%). Um número elevado de resistência antimicrobiana frente aos antibióticos utilizados na medicina veterinária foi encontrado. As menores resistências associadas aos melhores valores do fator de impacto foram encontrados para aminoglicosídeos, em especial amicacina, cloranfenicol, fluoroquinolonas (norfloxacina e ciprofloxacina). Já resultados intermediários foram encontrados para ampicilina associada a sulbactam, ceftriaxona, amoxacilina com ácido clavulônico e enrofloxacina. Conforme o número de drogas antimicrobianas resistentes, foram classificados como multirresistentes 64,26% (151/235) dos isolados, sendo 15.32% extensivamente resistentes. Já considerando a resistência a classes de antimicrobianos, 68,94% (162/235) dos isolados foram classificados como multirresistentes, sendo 19.15% extensivamente resistentes. Nenhum isolado bacteriano foi caracterizado como pan-resistente, porém 10 bactérias foram resistentes a todas as classes testadas, com susceptibilidade isolada a determinadas drogas. Por meio da avaliação dos perfis de resistência encontrados no período e local estudados e de literatura pertinente, percebe-se que há um aumento crescente no número de bactérias multirresistentes entre os animais domésticos o que caracteriza um grave risco à saúde pública. O arsenal terapêutico está se tornando cada vez mais diminuto e há mais dificuldade na seleção empírica de drogas, tornando essencial a realização de testes de susceptibilidade antimicrobiana para uma seleção mais específica na terapêutica antimicrobiana. Medidas educativas sobre o uso consciente dos antibióticos, controle de infecções e prevenção de zoonoses específicas para as localidades precisam ser instituídas para conhecimento dos profissionais do setor da saúde e acesso geral da população.
