PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho T.F., Pereira N.B., Rocha C.R.J., Figueiredo C.C., Rachid M.A. & Vasconcelos A.C. 2016. [Apoptosis and maturation of the bovine placenta: an immunohistochemical and morphometric study.] Apoptose e maturação placentária bovina: um estudo imuno-histoquímico e morfométrico. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):237-246. Departamento de Patologia Geral, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Avenida Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: carvalhotativet@hotmail.com Placental release after birth involves loss of maternal-fetal adhesion and occurs only after complete maturation of the placentoma related to the decrease in cellularity of fetal and maternal tissues. Apoptosis is required for both the normal maturation and release of the placenta after birth. The aim of this study was to evaluate the occurrence of apoptosis in samples of the placenta of cows in different stages of gestation. Samples of 15 healthy cow placentomas at 4 (n=5), 6 (n=5) and 9 (n=5) months of gestation were harvested and processed for routine histology, immunohistochemistry and histochemistry. The slides were stained with HE, PicroSirius Red and subjected to immunohistochemical analysis of proteins Caspase 3, Caspase 8, Bax and Bid. Increase in number of vessels was not associated with increase in vascular area during progression of gestation. The results of histomorphometry revealed increased labeling for Bax and Caspases 3 and 8 in trophoblastic binucleated cells in late pregnancy, where the Bid remained without significant change. Histomorphometry analyzing the mononuclear trophoblast cells showed a high expression for Bax in early pregnancy, but decreased at 6 months of gestation. Immunolabeling revealed increased Caspases 3/8 and Bid with advancing of gestation. Further evaluation of type I and III collagen showed a decrease of both types of collagens at the end of gestation, what is very important for the reduction of maternal-fetal adhesion. These results confirm that Caspases 3 and 8 and Bax are involved in the mechanisms of activation of apoptosis through mitochondrial intrinsic and/or extrinsic pathway during pregnancy in trophoblastic binucleated cells. In mononuclear trophoblast cells Bax looses importance in the apoptosis process, awhile Bid and caspases 3 and 8 become the most significant.

• Placenta

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Carvalho T.F., Pereira N.B., Rocha C.R.J., Figueiredo C.C., Rachid M.A. & Vasconcelos A.C. 2016. [Apoptosis and maturation of the bovine placenta: an immunohistochemical and morphometric study.] Apoptose e maturação placentária bovina: um estudo imuno-histoquímico e morfométrico. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):237-246. Departamento de Patologia Geral, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas Gerais, Avenida Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: carvalhotativet@hotmail.com A liberação da placenta após o parto envolve a perda da adesão materno-fetal e ocorre somente após a maturação completa do placentoma, que está relacionada com a diminuição da celularidade dos tecidos fetal e materno. A apoptose é requerida tanto para a maturação quanto para a liberação normal da placenta após o parto. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de apoptose em amostras de placenta de vacas em diferentes fases de gestação. Amostras de placentomas de 15 vacas saudáveis com 4 (n=5), 6 (n=5) e 9 (n=5) meses de gestação foram colhidas e processadas rotineiramente para a histologia, imunoistoquímica e histoquímica. As lâminas obtidas foram coradas em HE, Picrosirius Red e submetidas à análise imunoistoquímica das proteínas Caspase 3, Caspase 8, Bax e Bid. O aumento no número de vasos não necessariamente se associou ao aumento do calibre destes durante a evolução da gestação. Os resultados de histomorfometria revelaram aumento da marcação para Bax e Caspases 3 e 8 em células trofoblásticas binucleadas no final da gestação, enquanto o Bid se manteve sem alteração significativa. A histomorfometria das células trofoblásticas mononucleadas revelou expressão alta para Bax no início de gestação, com diminuição aos 6 meses de gestação e aumento das imunomarcações para Caspases 3 e 8, e Bid com o avanço gestacional. Os colágenos tipo I e III não aumentaram do terço médio ao final da gestação, o que é importante para a diminuição da adesão materno-fetal. Esses resultados confirmam que as Caspases 3 e 8, e o Bax estão envolvidos nos mecanismos de ativação da apoptose pela via intrínseca mitocondrial e/ou extrínseca ao longo da gestação em células trofoblásticas binucleadas, e que nas células trofoblásticas mononucleadas o Bax deixa de ser importante, enquanto o Bid e as Caspases 3 e 8 se tornam os mais significativos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Arnold D.R., Corrêa C.A.P., Lorena L.L.G., Gaspar R.C., Rossi G.F., Ifran A.M., Penteado J.C.T., Mingoti G. & Lopes F.L. 2015. Supplementation of fetal bovine serum alters histone modification H3R26me2 during preimplantation development of in vitro produced bovine embryos. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(7):605-612. Departamento de Apoio, Produção e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Rua Clovis Pestana 793, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. E-mail: flavialopes@fmva.unesp.br In vitro production (IVP) of bovine embryos is not only of great economic importance to the cattle industry, but is also an important model for studying embryo development. The aim of this study was to evaluate the histone modification, H3R26me2 during pre-implantation development of IVP bovine embryos cultured with or without serum supplementation and how these in vitro treatments compared to in vivo embryos at the morula stage. After in vitro maturation and fertilization, bovine embryos were cultured with either 0 or 2.5% fetal bovine serum (FBS). Development was evaluated and embryos were collected and fixed at different stages during development (2-, 4-, 8-, 16-cell, morula and blastocyst). Fixed embryos were then used for immunofluorescence utilizing an antibody for H3R26me2. Images of stained embryos were analyzed as a percentage of total DNA. Embryos cultured with 2.5% FBS developed to blastocysts at a greater rate than 0%FBS groups (34.85+5.43% vs. 23.38+2.93%; P<0.05). Levels of H3R26me2 changed for both groups over development. In the 0%FBS group, the greatest amount of H3R26me2 staining was at the 4-cell (P<0.05), 16-cell (P<0.05) and morula (P<0.05) stages. In the 2.5%FBS group, only 4-cell stage embryos were significantly higher than all other stages (P<0.01). Morula stage in vivo embryos had similar levels as the 0%FBS group, and both were significantly higher than the 2.5%FBS group. These results suggest that the histone modification H3R26me2 is regulated during development of pre-implantation bovine embryos, and that culture conditions greatly alter this regulation.

• Embryo development H3R26me2 desenvolvimento embrionário

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Arnold D.R., Corrêa C.A.P., Lorena L.L.G., Gaspar R.C., Rossi G.F., Ifran A.M., Penteado J.C.T., Mingoti G. & Lopes F.L. 2015. Supplementation of fetal bovine serum alters histone modification H3R26me2 during preimplantation development of in vitro produced bovine embryos. [Suplementação com soro fetal bovino altera a modificação de histona H3R26me2 durante o período pré-implantacional em embriões bovinos produzidos in vitro.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(7):605-612. Departamento de Apoio, Produção e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Rua Clovis Pestana 793, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. E-mail: flavialopes@fmva.unesp.br A produção in vitro (PIV) de embriões de bovinos não é apenas de grande importância econômica para a pecuária, mas é também um importante modelo para estudar o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a modificação de histona, H3R26me2 durante o desenvolvimento pré-implantacional em embriões bovinos produzidos in vitro, cultivados com ou sem suplementação de soro fetal bovino (SFB), bem como comparar essa modificação específica entre mórulas produzidas in vitro e in vivo. Após a maturação in vitro e fertilização, embriões foram cultivados com suplementação de 0 ou 2,5% SFB. O desenvolvimento embrionário foi avaliado e embriões foram coletados e fixados em diferentes fases durante o desenvolvimento (2, 4, 8 e 16 células, mórula e blastocisto). Os embriões fixados foram avaliados por imunofluorescência utilizando um anticorpo para H3R26me2. Imagens de embriões corados foram analisadas baseadas na porcentagem do DNA total. Embriões cultivados com 2,5% SFB tiveram uma taxa de desenvolvimento ao estágio de blastocisto maior que o grupo que não recebeu suplementação com SFB (34.85±5,43% vs 23.38±,93%; P<0,05). Níveis de H3R26me2 variaram para ambos os grupos ao longo do desenvolvimento. No grupo 0% SFB, a marcação para H3R26me2 foi mais intensa nos estágios de 4 células (P<0,05), 16 células (P<0,05) e mórula (P<0.05). No grupo 2.5% SFB, apenas os embriões de 4 células tiveram marcação significativamente maior que todas as outras fases (P<0,01). Mórulas produzidas in vivo apresentaram níveis de H3R26me2 semelhantes ao grupo 0% SFB, e ambos foram significativamente maiores que o grupo 2.5% SFB. Estes resultados sugerem que a modificação de histona H3R26me2 é regulada durante o desenvolvimento pré-implantacional de embriões bovinos, e que as condições de cultura alteram de maneira importante esta regulação.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Borges L.C., Leonardo A.S., Barreto-Vianna A.R.C., Borges J.R.J., Castro M.B. & Lima E.M.M. 2015. Morphoquantitative description of bovine digital cushion. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(7):671-676. Departamento de Anatomia Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, ICC Ala Sul, Campus Darcy Ribeiro, Cx. Postal 4508, Brasília, DF 70760-701, Brazil. E-mail: limaemm@unb.br The digital cushion is characterized as a modified subcutaneous tissue that absorbs the shock during gait, assists venous return of the hoof and supports a considerable part of body weight. Digital cushions have particular importance in the pathogenesis of the hoof, since they need to properly work in order to prevent compression and traumas in soft tissues. This study aimed to measure and determine how is the arrangement of these structures, and for this it was established the proportions of connective, adipose, vascular tissues and collagen fibers and collagen types found in palmar and plantar digital cushion of bovine using fore and hindlimbs of twelve adult zebu cattle of both sexes, 11 male and one female, with 269kg average carcass weight and without limb disorders. Fragments of cushions were subjected to conventional histology, cut to a thickness of 4µm and stained with Red Picrosirius. With digital optical microscope, the quantification of the connective tissue and differentiation of types of collagen used the Image Pro Plus® software, and of adipose and vascular tissue, the test point system. The mean and standard error were estimated with the GraphPad Prism 5.0 software, and then data were subjected to Kolmogorov-Smirnov normality test and Student’s t-test with significance level set at 5% for determining the amount of different tissues between fore and hindlimbs of studied animals. In forelimbs the mean and standard error of the connective tissue proportion was 50.10%+1.54, of the adipose tissue was 21.34%+1.44, and of vascular tissue was 3.43%+0.28. Hindlimbs presented a proportion of connective tissue of 61.61%+1.47, 20.66%+1.53 of adipose tissue, and 3.06%+0.20 of vascular tissue. A significant difference (p<0.001) was detected in the connective tissue proportion between fore and hindlimbs. Types I and II collagen fibers have presented, respectively, a proportion of 31.89% and 3.9% in forelimbs and 34.05% and 1.78% in hindlimbs. According to the used methodology, digital cushions had a clear differentiation relative to adipose tissue between fore and hindlimbs.

• Digital cushion claudication hoof tórus digital claudicação casco

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Borges L.C., Leonardo A.S., Barreto-Vianna A.R.C., Borges J.R.J., Castro M.B. & Lima E.M.M. 2015. Morphoquantitative description of bovine digital cushion. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(7):671-676. Departamento de Anatomia Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, ICC Ala Sul, Campus Darcy Ribeiro, Cx. Postal 4508, Brasília, DF 70760-701, Brazil. E-mail: limaemm@unb.br O tórus digital é caracterizado como um tecido subcutâneo modificado que atua na absorção do impacto durante a locomoção, auxilia o retorno venoso do casco e mantêm o suporte de uma considerável parte do peso corporal. Os tórus possuem particular importância nas patogêneses de casco, já que eles precisam trabalhar corretamente para prevenir compressões e traumas nos tecidos moles. Assim, o objetivo deste estudo foi quantificar e com isso determinar, como se arranjam estas estruturas, para tanto, foram estabelecidas as proporções dos tecidos conjuntivo, adiposo, vascular e ainda das fibras colágenas e dos tipos de colágenos encontrados nos tórus digitais palmares e plantares de bovinos. Foram utilizados membros torácicos e pélvicos de doze bovinos zebuínos adultos, de ambos os sexos, sendo onze machos e uma fêmea, com peso médio de carcaça com 269kg e sem afecções nos membros. Os fragmentos dos tórus foram submetidos à técnica histológica convencional, cortados em espessura de 4µm e corados com Picrosirius Red. Com o uso de microscópio óptico digital, o tecido conjuntivo e a diferenciação dos tipos de colágeno foram quantificados empregando-se o programa de análise de imagem Image Pro Plus® e para a quantificação dos tecidos adiposo e vascular foi utilizada o sistema teste de pontos. Através do programa GraphPad Prism 5.0 foram obtidas por meio de uma analise descritiva a media e o erro padrão da media, em seguida os dados foram submetidos à aplicação do teste de normalidade de Kolmogorov-Smirnov e ao teste “T” Student com nível de significância de 5% para a determinação da quantidade encontrada dos diferentes tecidos entre os membros torácicos e pélvicos dos animais estudados. Nos membros torácicos a média e o erro padrão da proporção de tecido conjuntivo foi de 50,10%+1,54, a de tecido adiposo foi de 21,34%+1,44 e a de tecido vascular foi de 3,43%+0,28. Os membros pélvicos apresentaram uma proporção de tecido conjuntivo de 61,61%+1,47, de tecido adiposo de 20,66%+1,53 e de tecido vascular de 3,06%+0,20. Verificou-se diferença estatística na proporção de tecido conjuntivo entre membros torácicos e pélvicos (p<0,001). As fibras colágenas tipo I e III apresentaram, respectivamente, uma proporção de 31,89% e 3,9% nos membros torácicos e 34,05% e 1,78% nos membros pélvicos. Os tórus digitais, de acordo com a metodologia utilizada, apresentaram diferenciação evidente em relação ao tecido adiposo entre membros torácicos e pélvicos.

Abstract in English:

ABASTRACT.- Faccin T.C., Brumatti R.C., Lima S.C., Madureira R.C., Fernandes C.E.S., Kommers G.D. & Lemos R.A.A. 2015. [Economic losses through condemnation of bovine livers in abattoirs due to fibrosis induced by Brachiaria spp. ingestion.] Perdas econômicas pela condenação em matadouro frigorífico de fígados de bovino por fibrose causada por ingestão de Braquiaria spp. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):547-551. Laboratório de Patologia Veterinária, Universidade Federal de Santa Maria, Avenida Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: tatifaccin@hotmail.com Chronic ingestion of Brachiaria spp. by cattle causes in the liver fibrosis, atrophy of left lobe, compensatory hypertrophy of the right lobe, and bile duct proliferation. Typically, these lesions are associated with accumulation in the hepatic parenchyma of cluster with foamy macrophages. This study surveyed bovine livers with those lesions in a slaughterhouse in Central Brazil and estimated the economic losses caused by condemnation of such affected livers. During the study period, 488,476 cattle were slaughter in this particular abattoir. From 5,295 livers condemned due to fibrosis, 192 with lesions were sampled and studied. Economic calculations permitted to infer that the condemnations represented a loss of R$ 108,817.60. It is concluded that the condemnation of livers due to brachiaria-induced fibrosis causes significant economic losses for the meat industry due to condemnation of 23.6 tons of beef liver with an estimate annual loss of more than R$ 100,000.00 in a single slaughterhouse.

• Brachiaria induced liver fibrosis liver condemnation fibrose hepática induzida pela ingestão de braquiária condenação de fígado

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Faccin T.C., Brumatti R.C., Lima S.C., Madureira R.C., Fernandes C.E.S., Kommers G.D. & Lemos R.A.A. 2015. [Economic losses through condemnation of bovine livers in abattoirs due to fibrosis induced by Brachiaria spp. ingestion.] Perdas econômicas pela condenação em matadouro frigorífico de fígados de bovino por fibrose causada por ingestão de Braquiaria spp. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):547-551. Laboratório de Patologia Veterinária, Universidade Federal de Santa Maria, Avenida Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: tatifaccin@hotmail.com A ingestão crônica de braquiária induz lesões hepáticas em bovinos caracterizadas por fibrose, atrofia do lobo esquerdo, hipertrofia compensatória do lobo direito e proliferação de ductos biliares. Tipicamente, essas lesões são associadas com agregados de macrófagos espumosos no parênquima hepático. Nesse trabalho foram estudados fígados com essas lesões num abatedouro frigorífico do Brasil Central e as perdas econômicas causadas pela condenação de tais fígados afetados foram estimadas. Durante o período estudado, 488.476 bovinos foram abatidos nesse matadouro frigorífico, dos quais 5.295 fígados foram condenados devido à fibrose, e 192 com lesão hepática foram estudados. Cálculos econômicos permitiram inferir que essas condenações representaram uma perda de R$ 108.817,60. Conclui-se que a condenação de fígados em razão de fibrose induzida pela ingestão de braquiária causa uma perda significativa para a indústria de carne e produtos bovinos devido à condenação de 23,6 toneladas de fígado em um ano em apenas um frigorífico, com perdas estimadas acima de R$ 100.000,00.

Abstract in English:

ABSTRACT.- De Alcântara B.K., Alfieri A.A., Headley S.A., Rodrigues W.B., Otonel R.A.A., Lunardi M. & Alfieri A.F. 2015. Molecular characterization of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13) DNA in equine sarcoids. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):431-436. Laboratory of Animal Virology, Department of Veterinary Preventive Medicine, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Sarcoids are fibroblastic lesions, which are considered as the most common skin tumors of horses; spontaneous regression rarely occurs. The bovine papillomavirus (BPV) types 1 and 2 may be involved in the pathogenesis of sarcoids, and probably the recently described BPV type (BPV13) might be associated with the pathogenesis of this lesion. This study characterized the DNA of BPVs in sarcoids from 15 horses from Brazil by analyzing 20 cutaneous lesions (12 recently collected; 8 from formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues). Histopathology confirmed the proliferative lesions as sarcoids. Three PCRs were performed to amplify papillomavirus (PV) DNA. For screening, the primers IFNR2/IDNT2 were used to amplify a fragment of the PV L1 ORF. The second primer set was complementary to a common sequence of the E5L2 genomic region of BPV1, 2, and 13. The third primer pair (FAP59/FAP64) targeted a fragment of the PVs L1 ORF. The screening and E5L2 PCRs yielded amplicons in all samples evaluated. The FAP amplicons identified BPV1, 2, and 13 only from fresh tissue samples. The phylogenetic analyses of E5L2 resulted in the identification of BPV1, 2, and 13 in 14 (70%), 2 (10%), and 4 (20%) sarcoids, respectively. Two horses demonstrated multiple lesions: the sarcoids of one of these contained only BPV1 DNA and those of the other contained three types of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13). This study confirmed the presence of BPV1, 2, and 13 DNA in equine sarcoids. Moreover, these findings represent the first description of three types of BPV diagnosed in the same horse, as well as the first confirmation of BPV1 and 2 in horses from Brazil.

• Papillomavirus Bovine Deltapapillomavirus skin tumor Papilomavírus Deltapapillomavirus bovino tumor de pele

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- De Alcântara B.K., Alfieri A.A., Headley S.A., Rodrigues W.B., Otonel R.A.A., Lunardi M. & Alfieri A.F. 2015. Molecular characterization of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13) DNA in equine sarcoids. [Caracterização molecular de DNA de Deltapapillomavirus bovino (BPV1, 2 e 13) em sarcoides equinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):431-436. Laboratory of Animal Virology, Department of Veterinary Preventive Medicine, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Sarcoides são tumores fibroblásticos, considerados os tumores de pele mais comuns em pele de equinos e que raramente apresentam regressão espontânea. Papilomavírus bovino (BPV) tipos 1 e 2 são relacionados com a patogenia do sarcoide e, provavelmente, o BPV tipo 13 (BPV13), recentemente descrito, também pode estar associado com a formação dessa lesão. Neste estudo, 20 amostras de lesões cutâneas, sendo 12 constituídas por tecidos frescos e 8 amostras de tecido fixado em formalina e embebido em parafina, provenientes de 15 cavalos foram utilizadas para a identificação do DNA de BPV. A análise histopatológica (HE) confirmou todas as lesões como sarcoide. Para a amplificação do DNA de papilomavírus (PV) foram realizadas três reações de PCR. Como triagem, os primers IFNR2/IDNT2 foram utilizados para amplificar um fragmento da ORF L1 do PV. O segundo par de primers utilizado é complementar a sequência dos genes E5 e L2 de BPVs 1, 2 e 13. O terceiro par de primers (FAP59/FAP64) utilizado tem o gene L1 como alvo. A primeira e a segunda PCRs permitiram amplificar produtos em todas as amostras avaliadas. Entretanto, na terceira reação, na qual foram utilizados os primers FAP, foi possível amplificar produtos com tamanho molecular esperado somente nas amostras constituídas por tecidos frescos. O sequenciamento de nucleotídeos e as análises filogenéticas realizadas nos fragmentos E5L2 resultaram na identificação de BPV1, 2 e 13 em 14 (70%), 2 (10%) e em 4 (20%) amostras de sarcoides, respectivamente. As amostras de sarcoides de um dos animais continha somente o DNA de BPV1. Entretanto, nas amostras provenientes do segundo cavalo foi possível identificar o DNA de três tipos de Deltapapillomavirus bovino (BPV1, 2 e 13) em lesões distintas. Este estudo ratifica a presença do DNA de BPV1, 2 e 13 em lesões de sarcoides em equinos, além de identificar três tipos de BPVs em um mesmo animal e descrever pela primeira vez no Brasil a presença de BPV1 e 2 nesse tipo de lesão.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cagnini D.Q., Cunha P.H.J., Pantoja J.C.F., Badial P.R., Oliveira-Filho J.P., Araújo-Junior J.P., Alfeiri A.A. & Borges A.S. 2015. Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):337-343. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Unesp-Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: asborges@fmvz.unesp.br Bovine meningoencephalitis caused by BHV-5, a double-stranded DNA enveloped virus that belongs to the family Herpesviridae and subfamily Alphaherpesvirinae, is an important differential diagnosis of central nervous diseases. The aim of this study was to describe the histological changes in the central nervous system of calves experimentally infected with BHV-5 and compare these changes with the PCR and IHC results. Formalin-fixed paraffin-embedded central nervous system samples from calves previously inoculated with BHV-5 were microscopically evaluated and tested using IHC and PCR. All the animals presented with nonsuppurative meningoencephalitis. From 18 evaluated areas of each calf, 32.41% and 35.19% were positive by IHC and PCR, respectively. The telencephalon presented more accentuated lesions and positive areas in the PCR than other encephalic areas and was the best sampling area for diagnostic purposes. Positive areas in the IHC and PCR were more injured than IHC and PCR negative areas. The animal with neurological signs showed more PCR- and IHC-positive areas than the other animals.

• Bovine herpesvirus 5 meningoencephalitis herpesvirus bovino 5 meningoencefalite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cagnini D.Q., Cunha P.H.J., Pantoja J.C.F., Badial P.R., Oliveira-Filho J.P., Araújo-Junior J.P., Alfieri A.A. & Borges A.S. 2015. Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves. [Estudo histopatológico, imuno-histoquímico e molecular da infecção por BHV-5 no sistema nervoso central de bovinos experimentalmente infectados.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):337-343. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Unesp-Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: asborges@fmvz.unesp.br A meningoencefalite bovina causada pelo BHV-5, um vírus DNA fita dupla envelopado que pertence à família Herpesviridae e subfamília Alphaherpesvirinae, é um importante diagnóstico diferencial das doenças do sistema nervoso central. O objetivo deste estudo foi descrever as alterações histológicas no sistema nervoso central de bovinos experimentalmente infectados com BHV-5 e comparar estas alterações com os resultados de imunoistoquímica (IHQ) e PCR. Amostras do sistema nervoso central de bezerros previamente inoculados com BHV-5 foram microscopicamente avaliadas e submetidas à IHQ e PCR. Todos os animais apresentaram meningoencefalite não-supurativa. Das 18 áreas avaliadas de cada bezerro, 32,41% e 35,13% foram positivas na IHQ e PCR, respectivamente. O telencéfalo apresentou lesões mais acentuadas e foi mais positivo na PCR do que as demais áreas encefálicas e se apresentou como a melhor área para coleta de material para o diagnóstico. As áreas positivas na IHQ e na PCR apresentaram lesões mais acentuadas do que as áreas negativas para as mesmas técnicas. O animal com sinais neurológicos apresentou mais áreas positivas para PCR e IHQ do que os demais animais.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Borsanelli A.C., Gaetti-Jardim Júnior E., Döbereiner J. & Dutra I.S. 2015. Treponema denticola in the microflora of bovine periodontitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):237-240. Departamento de Apoio, Produção e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Rua Clóvis Pestana 793, Cx. Postal 533, Jardim Dona Amélia, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. E-mail: isdutra@fmva.unesp.br Periodontitis in cattle is an infectious purulent progressive disease associated with strict anaerobic subgingival biofilm and is epidemiologically related to soil management at several locations of Brazil. This study aimed to detect Treponema species in periodontal pockets of cattle with lesions deeper than 5mm in the gingival sulcus of 6 to 24-month-old animals considered periodontally healthy. We used paper cones to collect the materials, after removal of supragingival plaques, and kept frozen (at -80°C) up to DNA extraction and polymerase chain reaction (PCR) using T. amylovorum, T. denticola, T. maltophilum, T. medium and T. vincentii primers. In periodontal pocket, it was possible to identify by PCR directly, the presence of Treponema amylovorum in 73% of animals (19/26), T. denticola in 42.3% (11/26) and T. maltophilum in 54% (14/26). Among the 25 healthy sites, it was possible to identify T. amylovorum in 18 (72%), T. denticola in two (8%) and T. maltophilum in eight (32%). Treponema medium and T. vincentii were not detected over all 51 evaluated samples. The presence of Treponema amylovorum, T. maltophilum and, in particular, the widely recognized T. denticola in subgingival microflora brings an original and potencially important contribution in studies of the bovine periodontitis.

• Periodontitis periodontal disease subgingival microflora Treponema denticola periodontite doença periodontal microbiota subgengival

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Borsanelli A.C., Gaetti-Jardim Júnior E., Döbereiner J. & Dutra I.S. 2015. Treponema denticola in the microflora of bovine periodontitis. [Treponema denticola na microbiota da periodontite bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):237-240. Departamento de Apoio, Produção e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Rua Clóvis Pestana 793, Cx. Postal 533, Jardim Dona Amélia, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. E-mail: isdutra@fmva.unesp.br A periodontite bovina é um processo infeccioso purulento e progressivo associado à presença de biofilme subgengival anaeróbio estrito e epidemiologicamente relacionada ao manejo do solo em amplas áreas geográficas do Brasil. O trabalho teve por objetivo detectar espécies de Treponema presentes na bolsa periodontal de bovinos com lesões de profundidade maior que 5mm e do sulco gengival de animais com idade de 6 a 24 meses e considerados periodontalmente sadios. Os materiais foram colhidos por meio de cones de papel, após a remoção do biofilme supragengival, e mantidos sob congelamento (-80°C) até a extração do DNA e realização da reação em cadeia da polimerase (PCR) com o emprego de iniciadores de T. amylovorum, T. denticola, T. maltophilum, T. medium e T. vincentii. Na bolsa periodontal de 73% (19/26) dos animais foi possível detectar diretamente, pela PCR, a presença de Treponema amylovorum, de 42,3% (11/26) T. denticola e de 54% (14/26) T. maltophilum. Dos 25 sítios sadios, em 18 (72%) foi possível identificar T. amylovorum, em dois (8%) T. denticola e em oito (32%) T. maltophilum. Treponema medium e T. vincentii não foram detectados nas 51 amostras avaliadas. A presença de Treponema amylovorum, T. maltophilum na microbiota subgengival, e em especial do amplamente reconhecido periodontopatógeno T. denticola, traz uma contribuição original de importância potencial nos estudos da periodontite bovina.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Blagitz M.G., Souza F.N., Batista C.F., Santos B.P., Parra A.C., Azevedo L.F.F. & Della Libera A.M.M.P. 2015. Expression of CD14 and toll-like receptors 2 and 4 by milk neutrophils in bovine mammary glands infected with Corynebacterium bovis. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(1):1-5. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: magblagitz@uol.com.br This study evaluated the expression of CD14, toll-like receptor (TLR) 2 and TLR4 on the surface of milk neutrophils in bovine mammary glands infected with Corynebacterium bovis. Here, we used 23 culture-negative control quarters with no abnormal secretion on the strip cup test and milk somatic cell count lower than 1x105 cells/mL, and 14 C. bovis infected quarters. The identification of neutrophils, as well as, the percentage of neutrophils that expressed CD14, TLR2 and TLR4 were analyzed by flow cytometry using monoclonal antibodies. The present study encountered no significant difference in the percentages of milk neutrophils that expressed TLR2 and TLR4 or in the expression of TLR4 by milk neutrophils. Conversely, a lower median fluorescence intensity of TLR2 in milk neutrophils was observed in C. bovis-infected quarters. The percentage of neutrophils that expressed CD14 and the median fluorescence intensity of CD14 in milk neutrophils was also lower in C. bovis-infected quarters.

• Immune response mastitis milk leukocyte resposta imune mastite leite leucócitos polimorfonucleares

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Blagitz M.G., Souza F.N., Batista C.F., Santos B.P., Parra A.C., Azevedo L.F.F. & Della Libera A.M.M.P. 2015. Expression of CD14 and toll-like receptors 2 and 4 by milk neutrophils in bovine mammary glands infected with Corynebacterium bovis. [Expressão de CD14 e dos receptores do tipo toll 2 e 4 por neutrófilos lácteos provenientes de glândulas infectadas por Corynebacterium bovis.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(1):1-5. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: magblagitz@uol.com.br O presente estudo objetivou avaliar alterações na expressão de CD14, e dos receptores do tipo toll (TLR) 2 e 4 na superfície de neutrófilos lácteos provenientes de glândulas mamárias infectadas por Corynebacterium bovis. O presente estudo utilizou 23 quartos negativos no exame bacteriológico, sem alterações na prova de fundo escuro e com contagem automática de células somáticas menor que 1 x105 células/mL, e 14 quartos mamários infectados por C. bovis A identificação de neutrófilos, assim como a porcentagem de neutrófilos lácteos que expressaram CD14, TLR2 e 4 foram avaliadas por citometria de fluxo utilizando anticorpos monoclonais. A porcentagem de neutrófilos que expressaram TLR2 e TLR4 nos quartos mamários infectados por C. bovis não diferiu dos quartos mamários sadios, assim como na expressão de TLR4. No entanto, a intensidade de fluorescência do TLR2 na superfície dos neutrófilos foi menor nos quartos mamários infectados por C. bovis. A porcentagem de neutrófilos que expressaram CD14 e a intensidade de fluorescência da molécula de CD14 foi menor na superfície dos neutrófilos lácteos dos quartos infectados por C. bovis.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Vargas M.I., Patarroyo J.H., Hernandez M., Peconick A.P., Patarroyo A.M., Tafur G.A., Araújo L.S. & Valente F. 2014. Babesia bovis: expression of adhesion molecules in bovine umbilical endothelial cells stimulated with plasma from infected cattle. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(10):937-941. Laboratório de Biologia e Controle de Hematozoários e Vetores, Departamento de Veterinária, Instituto de Biotecnologia Aplicada à Agropecuária, Universidade Federal de Viçosa, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-900, Brazil. E- mail: jpatarro@ufv.br Ten male, 12-month-old Jersey with intact spleens, serologically and parasitologically free from Babesia were housed individually in an arthropod-free isolation system from birth and throughout entire experiment. The animals were randomly divided into two groups. Five animals (group A) were intravenously inoculated with 6.6 X107 red blood cells parasitized with pathogenic sample of Babesia bovis (passage 7 BboUFV-1), for the subsequent “ex vivo” determination of the expression of adhesion molecules. Five non-inoculated animals (group B) were used as the negative control. The expression of the adhesion molecules ICAM-1, VCAM, PECAM-1 E-selectin and thrombospondin (TSP) was measured in bovine umbilical vein endothelial cells (BUVECs). The endothelial cells stimulated with a pool of plasma from animals infected with the BboUFV-1 7th passage sample had a much more intense immunostaining of ICAM-1, VCAM, PECAM-1 E-selectin and TSP, compared to the cells which did not received the stimulus. The results suggest that proinflammatory cytokines released in the acute phase of babesiosis may be involved in the expression of adhesion molecules thereby implicating them in the pathophysiology of babesiosis caused by B. bovis.

• Babesia bovis

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Vargas M.I., Patarroyo J.H., Hernandez M., Peconick A.P., Patarroyo A.M., Tafur G.A., Araújo L.S. & Valente F. 2014. Babesia bovis: expression of adhesion molecules in bovine umbilical endothelial cells stimulated with plasma from infected cattle. [Babesia bovis: expressão de moléculas de adesão em células endoteliais de cordão umbilical de bovinos estimuladas com plasma de bovinos infectados.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(10):937-941. Laboratório de Biologia e Controle de Hematozoários e Vetores, Departamento de Veterinária, Instituto de Biotecnologia Aplicada à Agropecuária, Universidade Federal de Viçosa, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-900, Brazil. E- mail: jpatarro@ufv.br Dez bezerros machos, da raça Jersey, com 1 ano de idade com baços “in situ”, sorológica e parasitologicamente livres de Babesia, foram mantidos em baias individuais no isolamento a prova de artrópodes do Depto de Veterinária desde o nascimento e ao longo de toda a experimentação. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos. Cinco animais (grupo A) foram inoculados por via intravenosa com 6,6 x107 hemácias parasitados com amostra patogênica de Babesia bovis (BboUFV - 1 7ª passagem) , para a determinação subseqüente “ex vivo” da expressão de moléculas de adesão . Cinco animais não inoculados (Grupo B ) foram utilizados como controlo negativo . A expressão de moléculas de adesão ICAM - 1, VCAM , PECAM – 1, E - selectina e trombospondina ( TSP ) foi medida em células endoteliais da veia umbilical de bovinos (BUVECs). As células endoteliais estimuladas com um pool de plasma proveniente de animais infectados com BboUFV - 1 7ª passagem tinham uma imunocoloração muito mais intensa de ICAM - 1 , VCAM , PECAM - 1 de E - selectina e de TSP , em comparação com as células que não receberam o estímulo . Os resultados sugerem que as citocinas pró-inflamatórias liberados na fase aguda da babesiose pode estar envolvida na expressão de moléculas de adesão , implicando , assim, elas na fisiopatologia da babesiose causada por B. bovis.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Beuron D.C., Cortinhas C.S., Botaro B.G., Macedo S.N., Gonçalves J.L., Brito M.A.V.P. & Santos M.V. 2014. Risk factors associated with the antimicrobial resistance of Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(10):947-952. Departamento de Nutrição e Produção Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Duque de Caxias Norte 225, Pirassununga, SP 13635-900, Brazil. E-mail: mveiga@usp.br The objective of this study was to evaluate herd management practices and mastitis treatment procedures as risk factors associated with Staphylococcus aureus antimicrobial resistance. For this study, 13 herds were selected to participate in the study to evaluate the association between their management practices and mastitis treatment procedures and in vitro antimicrobial susceptibility. A total of 1069 composite milk samples were collected aseptically from the selected cows in four different periods over two years. The samples were used for microbiological culturing of S. aureus isolates and evaluation of their antimicrobial susceptibility. A total of 756 samples (70.7%) were culture-positive, and S. aureus comprised 27.77% (n=210) of the isolates. The S. aureus isolates were tested using the disk-diffusion susceptibility assay with the following antimicrobials: ampicillin 10mg; clindamycin 2&#956;g; penicillin 1mg; ceftiofur 30&#956;g; gentamicin 10mg; sulfa-trimethoprim 25&#956;g; enrofloxacin 5&#956;g; sulfonamide 300&#956;g; tetracycline 30&#956;g; oxacillin 1mg; cephalothin 30&#956;g and erythromycin 5&#956;g. The variables that were significantly associated with S. aureus resistance were as follows: the treatment of clinical mastitis for ampicillin (OR=2.18), dry cow treatment for enrofloxacin (OR=2.11) and not sending milk samples for microbiological culture and susceptibility tests, for ampicillin (OR=2.57) and penicillin (OR=4.69). In conclusion, the identification of risk factors for S. aureus resistance against various mastitis antimicrobials is an important information that may help in practical recommendations for prudent use of antimicrobial in milk production.

• Staphylococcus aureus mastitis mastite

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Beuron D.C., Cortinhas C.S., Botaro B.G., Macedo S.N., Gonçalves J.L., Brito M.A.V.P. & Santos M.V. 2014. Risk factors associated with the antimicrobial resistance of Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis. [Fatores de risco associados com a resistência antimicrobiana de Staphylococcus aureus isolados da mastite bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(10):947-952. Departamento de Nutrição e Produção Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Duque de Caxias Norte 225, Pirassununga, SP 13635-900, Brazil. E-mail: mveiga@usp.br Objetivou-se com este estudo avaliar os fatores de risco associados às práticas de manejo e tratamento de mastite e a resistência aos antimicrobianos de Staphylococcus aureus isolados de vacas com mastite. Foram selecionados para o presente estudo 13 rebanhos localizados na região de Pirassununga/SP. Foi aplicado um questionário contendo informações para o levantamento de fatores de risco relacionados à resistência aos antimicrobianos e às práticas de manejo e tratamento de mastite. Após a seleção dos rebanhos e aplicação dos questionários, foram utilizados 210 isolados de S. aureus de amostras compostas de leite coletadas durante 24 meses, em quatro períodos, para realização dos testes de resistência. Os antimicrobianos testados foram: ampicilina 10µg, clindamicina 2µg, penicilina 1µg, eftiofour 30µg, gentamicina 10µg, sulfatrimetropin 25µg, enrofloxacina 5µg, sulfonamida 300µg, tetraciclina 30µg, oxacilina 1µg, cefalotina 30µg e eritromicina 5µg. As variáveis que foram significativamente associadas à resistência de S. aureus foram: o tratamento da mastite clínica para ampicilina (OR = 2,18), o tratamento da vaca seca para enrofloxacina (OR=2,11), e o não envio de amostras de leite para a cultura microbiológica e testes de sensibilidade, para ampicilina (OR=2,57) e penicilina (OR=4,69). Em conclusão, a identificação dos fatores de risco para a resistência S. aureus frente aos principais agentes antimicrobianos, utilizados para tratamento da mastite, pode auxiliar o estabelecimento do uso prudente de antimicrobianos na produção de leite.