PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Mayorga L.F.S.P., Bhering R.C.C., Medeiros L.C.C., Silva E.L.F., Nóbrega Y.C., Rangel M.C.V., Fonseca L.A. & Rossi Junior J.L. 2016. [Hematological and biochemical values of Magellanic penguins in rehabilitation in Espírito Santo, southeastern Brazil.] Valores hematológicos e bioquímicos de pinguins-de-Magalhães em reabilitação no Espírito Santo, sudeste do Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):65-70. Instituto de Pesquisa e Reabilitação de Animais Marinhos, Rodovia BR-262 Km 0, Cariacica, ES 29140-130, Brazil. E-mail: luisfelipe@ipram-es.org.br This paper reports hematological and biochemical values of juveniles Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) stranded in Espírito Santo and Rio de Janeiro, Southeastern Brazil, that were sent for rehabilitation. The average values were: erythrocytes 2.55±0,54 milhões/µL, hemoglobin 13.37±3,91g/dL, hematocrit 41.5±0.04%, plasma protein 6.34±0.81g/dL, leukocytes 16,301±6,402/µL, thrombocytes 20,516±4,591 células/µL3, mean cell volume (MCV) 172.0±53.0 fL, mean cell hemoglobin concentration (MCHC) 26.41±0.02%, alanine transaminase (ALT) 50.0±17.89 U/L, uric acid 8.93±3.0mg/dL, albumin 1.68±0.53mg/dL, calcium 9.7±0.57mg/dL, phosphorus 10.39±8.5mg/dL and glucose 211.6±30.3mg/dL. Values of erythrocytes, MCV and MCH were discrepant in relation to the current reference values. Leukocytes and thrombocytes values has meant inconclusive. Hematocrit, hemoglobin, plasma protein and biochemical values provided important contribution for the establishment of reference parameters.

• Hematology penguins Spheniscus magellanicus hematologia pinguins-de-Magalhães

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Mayorga L.F.S.P., Bhering R.C.C., Medeiros L.C.C., Silva E.L.F., Nóbrega Y.C., Rangel M.C.V., Fonseca L.A. & Rossi Junior J.L. 2016. [Hematological and biochemical values of Magellanic penguins in rehabilitation in Espírito Santo, southeastern Brazil.] Valores hematológicos e bioquímicos de pinguins-de-Magalhães em reabilitação no Espírito Santo, sudeste do Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):65-70. Instituto de Pesquisa e Reabilitação de Animais Marinhos, Rodovia BR-262 Km 0, Cariacica, ES 29140-130, Brazil. E-mail: luisfelipe@ipram-es.org.br Este trabalho apresenta valores hematológicos e bioquímicos de pinguins-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) juvenis que arribaram no Espírito Santo e Rio de Janeiro, litoral sudeste do Brasil, e foram encaminhados a reabilitação. Os valores médios obtidos foram: eritrócitos 2.55±0.54 milhões/µL; hemoglobina 13,37±3,91g/dL; hematócrito 41,5±0,04%; proteína plasmática 6,34±0,81g/dL; leucócitos 16.301±6.402/µL; trombócitos 20.516±4.591 células/µL; volume corpuscular médio (VCM) 172,0±53,0 fL; concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) 26,41±0,02%; alanina transaminase (ALT) 50,0±17,89 U/L; ácido úrico 8,93±3,0mg/dL; albumina 1,68±0,53g/dL; cálcio 9,7±0,57mg/dL; fósforo 10,39±8,5mg/dL e glicose 211,6±30,3mg/dL. Valores de eritrócitos, VCM e CHCM foram discrepantes em relação aos valores de referência atuais. Valores de leucócitos e trombócitos tem significado inconclusivo. Hematócrito, hemoglobina, proteína plasmática e valores bioquímicos forneceram importante contribuição para o estabelecimento de parâmetros de referência.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Dias R.P., Teixeira M.F.S., Costa E.C., Farias A.C., Azevedo D.A.A., Aguiar T.D.F. & Pinheiro M.A. 2016. Potential for in vitro mesoderm differentiation of Wharton’s jelly cells from ovine umbilical cord isolated in different culture media. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):79-88. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Laboratório de Virologia, Faculdade de Veterinária, Universidade Estadual do Ceará, Av. Silas Munguba, 1700, Itaperi, Fortaleza, CE 60740-000, Brasil. E-mail: ronaldodias01@yahoo.com.br The mammalian Wharton’s jelly of umbilical cord (WJUC) is a promising source of multipotent cells, providing advantages due to ethical implications, ease of collection and the absence of teratomas in pre-clinical trials. Ovine multipotent cells have already been isolated from various tissues, however there are no reports using umbilical cords in this species. This study aimed to investigate the best medium to transport the umbilical cord, to isolate and maintain ovine WJUC cells and to compare in vitro growth and mesodermal differentiation potential. Eight ovine umbilical cords were obtained during parturition, sectioned and transported in six different media: MEM, low glucose DMEM, M199, RPMI 1640, PBS and saline. For each transportation medium, four culture media were used and the tissue was explanted in 24-well plates and cultured in MEM, low glucose DMEM, M199 and RPMI 1640, all with 10% FBS. Every experiment was conducted with low-passage (P2), investigating MTT viability during four days and adipogenic, chondrogenic and osteogenesis differentiation was induced in vitro. The most effective transport medium (p<0.1) was low glucose DMEM. There was no bacterial or fungal contamination from collection. Cells from Wharton’s jelly of ovine umbilical cords collected at natural birth possess fibroblastic morphology and the capacity for in vitro differentiation into adipogenic, chondrogenic and osteogenic cell lines. MTT tests and in vitro differentiation experiments revealed that cell culture medium modulates the behavior of cells and is an important factor for proliferation and maintenance of multipotency. Low glucose DMEM was the most suitable medium for the isolation of cells from Wharton’s jelly of ovine umbilical cord.

• Sheep umbilical cord chondrogenesis osteogenesis cordão umbilical ovino condrogênese osteogênese

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Dias R.P., Teixeira M.F.S., Costa E.C., Farias A.C., Azevedo D.A.A., Aguiar T.D.F. & Pinheiro M.A. 2016. Potential for in vitro mesoderm differentiation of Wharton’s jelly cells from ovine umbilical cord isolated in different culture media. [Potencial de diferenciação in vitro de células provenientes da geleia de Wharton de cordões umbilicais ovinos isolados em diferentes meios de cultivo.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):79-88. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Laboratório de Virologia, Faculdade de Veterinária, Universidade Estadual do Ceará, Av. Silas Munguba, 1700, Itaperi, Fortaleza, CE 60740-000, Brasil. E-mail: ronaldodias01@yahoo.com.br A geleia de Wharton do cordão umbilical (GWCU) de mamíferos é uma fonte promissora de células multipotentes, sendo vantajosa por aspectos éticos, facilidade de coleta e não causar teratomas em ensaios pré-clínicos. Em ovinos, células multipotentes já foram isoladas de vários tecidos, no entanto, não existem relatos do isolamento a partir do cordão umbilical nesta espécie. O objetivo do presente estudo foi investigar o melhor meio para o transporte do cordão umbilical, isolar e manter as células da GWCU ovino em diferentes meios e comparar a proliferação e o potencial de diferenciação mesodermal in vitro. Oito cordões umbilicais foram obtidos, por ocasião do parto natural, seccionados e transportados em seis diferentes meios que consistiram em MEM, DMEM baixa glicose, M199, RPMI 1640, PBS e soro fisiológico. Para cada meio de transporte foram utilizados quatro meios de cultivo, sendo o tecido explantado em placas de 24 poços e cultivados em MEM, DMEM baixa glicose, M199 e RPMI 1640, todos com 10% SFB. Todo o experimento foi realizado em baixa passagem (P2) investigando viabilidade pelo MTT por quatro dias além da indução à diferenciação adipogênica, condrogênica e osteogênica in vitro. O meio de transporte mais efetivo (P<0,10) foi o DMEM baixa glicose. Não houve contaminações bacterianas ou fúngicas decorrentes da coleta. Células oriundas da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino colhido por ocasião do parto natural possuem morfologia fibroblastóide e capacidade de diferenciação in vitro nas linhagens adipogênica, condrogênica e osteogênica. Os ensaios de MTT e diferenciação in vitro, revelaram que o meio de cultura celular modula o comportamento destas células, sendo um fator importante tanto para a proliferação como para a manutenção da multipotência, destacando o DMEM baixa glicose como o meio mais adequado para o transporte e isolamento de células da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Namazi F., Omidi A., Abbasi S., Afsar M., Honarmand M. & Nazifi S. 2016. Starvation and refeeding in rats: effect on some parameters of energy metabolism and electrolytes and changes of hepatic tissue. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):101-105. Department of Pathobiology, School of Veterinary Medicine, Shiraz University, Shiraz, Iran. E-mail: fnamazi@shirazu.ac.ir Regarding the importance of starvation and refeeding and the occurrence of refeeding syndrome in various conditions, the present study was conducted to investigate the effects of refeeding on some parameters of energy metabolism and electrolytes and changes of hepatic tissue in male Wistar rats. Fifty-seven rats were divided into six groups, having 6 to 11 rats. Food was provided ad-libitum until three months and then the first group was considered without starvation (day 0). Other rats were fasted for two weeks. Group 2 was applied to a group immediately after starvation (day 14). Groups 3 to 6 were refed in days 16 till 22, respectively. At the end of each period, blood and tissue samples were taken and histopathological and serum analysis, including serum electrolytes (calcium, phosphorus, sodium, potassium), the energy parameters (glucose, insulin, cortisol) and the liver enzymes (ALT, AST, ALP) were determined. Insulin decreased by starvation and then showed an increasing trend compared to starvation period, which the highest amount of this parameter was observed eight days post-refeeding. Serum glucose level showed the opposite pattern of insulin. Histopathological examination of the tissue sections revealed clear vacuoles after starvation and refeeding, in which the severity of lesions gradually decreased during refeeding. The cortisol level decreased by starvation and then increased during refeeding. Also, potassium and phosphorus concentrations declined by refeeding and the serum sodium and potassium levels were changed in the relatively opposite manner. The calcium level decreased by starvation and then increased during refeeding. These results could help recognize and remedy the refeeding syndrome.

• Energy metabolism electrolytes and changes hepatic tissue rat

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Namazi F., Omidi A., Abbasi S., Afsar M., Honarmand M. & Nazifi S. 2016. Starvation and refeeding in rats: effect on some parameters of energy metabolism and electrolytes and changes of hepatic tissue. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):101-105. Department of Pathobiology, School of Veterinary Medicine, Shiraz University, Shiraz, Iran. E-mail: fnamazi@shirazu.ac.ir Regarding the importance of starvation and refeeding and the occurrence of refeeding syndrome in various conditions, the present study was conducted to investigate the effects of refeeding on some parameters of energy metabolism and electrolytes and changes of hepatic tissue in male Wistar rats. Fifty-seven rats were divided into six groups, having 6 to 11 rats. Food was provided ad-libitum until three months and then the first group was considered without starvation (day 0). Other rats were fasted for two weeks. Group 2 was applied to a group immediately after starvation (day 14). Groups 3 to 6 were refed in days 16 till 22, respectively. At the end of each period, blood and tissue samples were taken and histopathological and serum analysis, including serum electrolytes (calcium, phosphorus, sodium, potassium), the energy parameters (glucose, insulin, cortisol) and the liver enzymes (ALT, AST, ALP) were determined. Insulin decreased by starvation and then showed an increasing trend compared to starvation period, which the highest amount of this parameter was observed eight days post-refeeding. Serum glucose level showed the opposite pattern of insulin. Histopathological examination of the tissue sections revealed clear vacuoles after starvation and refeeding, in which the severity of lesions gradually decreased during refeeding. The cortisol level decreased by starvation and then increased during refeeding. Also, potassium and phosphorus concentrations declined by refeeding and the serum sodium and potassium levels were changed in the relatively opposite manner. The calcium level decreased by starvation and then increased during refeeding. These results could help recognize and remedy the refeeding syndrome.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Valente F.L., Ferreira A.P.B.R., Costa L.D., Louzada M.J.Q., Patarroyo J.H. & Vargas M.I. 2016. Effects of chronic mild stress on parameters of bone assessment in adult male and female rats. [Efeito do estresse moderado crônico sobre parâmetros de avaliação óssea em ratos adultos machos e fêmeas.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):106-112. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Campus Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Viçosa, MG 36570-900, Brazil. E-mail: bebel@ufv.br Osteoporosis is a multifactorial disease of high prevalence and has great impact on quality of life, because the effects on bone structure increase the risk of fractures, what may be very debilitating. Based on the observation that patients with depression have lower bone mineral density than healthy individuals, many studies have indicated that stress could be an aggravating factor for bone loss. This study evaluates the effect of a protocol of chronic mild stress (CMS) on parameters of bone assessment in male and female rats. Five 5-monh-old rats of each sex underwent a schedule of stressor application for 28 days. Stressors included cold, heat, restraint, cage tilt, isolation, overnight illumination, and water and food deprivation. Five rats of each sex were kept under minimum intervention as control group. The animals were weighed at beginning and end of the period, and after euthanasia had their bones harvested. Femur, tibia and lumbar vertebrae were analyzed by bone densitometry. Biomechanical tests were performed in femoral head and diaphysis. Trabecular bone volume was obtained from histomorphometric analysis of femoral head and vertebral body, as well as of femoral midshaft cross-sectional measures. Not all parameters analyzed showed effect of CMS. However, tibial and L4 vertebral bone mineral density and cross-sectional cortical/medullar ratio of femoral shaft were lower in female rats submitted to the CMS protocol. Among male rats, the differences were significant for femoral trabecular bone volume and maximum load obtained by biomechanical test. Thus, it could be confirmed that CMS can affect the balance of bone homeostasis in rats, what may contribute to the establishment of osteopenia or osteoporosis.

• Stress osteoporosis bone densitometry bone histomorphometry

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Valente F.L., Ferreira A.P.B.R., Costa L.D., Louzada M.J.Q., Patarroyo J.H. & Vargas M.I. 2016. Effects of chronic mild stress on parameters of bone assessment in adult male and female rats. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):106-112. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Campus Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Viçosa, MG 36570-900, Brazil. E-mail: bebel@ufv.br A osteoporose é uma doença multifatorial, de alta prevalência e que tem um grande impacto na qualidade de vida, principalmente porque os efeitos sobre a estrutura do osso aumentam o risco de fraturas, que podem ser muito debilitantes. Com base na observação de que pacientes com depressão têm menor densidade mineral óssea que indivíduos saudáveis&#8203;&#8203;, muitos estudos têm indicado que o estresse pode ser um fator agravante para a perda óssea. Este estudo avalia o efeito de um protocolo de estresse moderado crônico (EMC) em parâmetros de avaliação óssea em ratos machos e fêmeas. Cinco animais de cada sexo, com cinco meses de idade, foram submetidos a um cronograma de aplicação de estressores durante 28 dias. Os estressores incluídos foram: frio, calor, contenção, inclinação da gaiola, isolamento, iluminação durante a noite e privação de água e ração. Cinco animais de cada sexo foram mantidos com um mínimo de intervenção como grupo controle. Os animais foram pesador no início e no final do período, e após eutanásia tiveram seus ossos coletados. Fêmur, tíbia e vértebra lombar foram analisados por densitometria óssea. Testes biomecânicos foram realizados na cabeça e na diáfise do fêmur. Volume trabecular ósseo foi obtido a partir de análise histomorfométricas da cabeça do fêmur e do corpo vertebral, bem como medidas da seção transversal diáfise femoral. Nem todos os parâmetros avaliados sofreram efeito do protocolo de EMC. No entanto, a densidade mineral óssea da tíbia e da vértebra L4 e a razão osso cortical/medula da seção transversal da diáfise femoral foram menores nas fêmeas submetidas ao protocolo. Entre os ratos machos, as diferenças foram significativas no volume trabecular ósseo da cabeça femoral e na carga máxima obtida no teste biomecânico. Assim, confirma-se que o protocolo de EMC pode afetar o equilíbrio da homeostase óssea em ratos, o que pode contribuir para o estabelecimento de osteopenia ou osteoporose.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Guimarães F.F., Joaquim S.F., Manzi M.P., Silva R.C., Bruder-Nascimento A.C.M.O., Costa E.O. & Langoni H. 2016. Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1160-1164. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson’s correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson’s correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.

• Phenotype genotype Staphylococcus spp. mastitis fenotipo genótipo mastite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Guimarães F.F., Joaquim S.F., Manzi M.P., Silva R.C., Bruder-Nascimento A.C.M.O., Costa E.O. & Langoni H. 2016. Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis. [Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1160-1164. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Guerra Filho J.B.P., Yamatogi R.S., Possebon F.S., Fernandes S.A., Tiba-Casas M.R., Lara G.H.B., Ribeiro M.G. & Pinto J.P.A.N. 2016. Frequency, serotyping and antimicrobial resistance pattern of Salmonella from feces and lymph nodes of pigs. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1165-1170. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicna Veterinária e Zootecnia Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: josepaes@fmvz.unesp.br Salmonellosis is a foodborne disease caused by bacteria of the genus Salmonella, being pigs and pork-products potentially important for its occurrence. In recent decades, some serovars of Salmonella have shown increase of resistance to conventional antimicrobials used in human and animal therapy, with serious risks for public health. The aim of this study was to evaluate feces (n=50), mediastinal (n=50), mesenteric (n=50) and mandibular (n=50) lymph nodes obtained from slaughter houses for Salmonella spp. Positive samples were serotyped and subjected to an in vitro antimicrobial susceptibility test, including the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production. Salmonella species were identified in 10% (20/200) of total samples. From these, 20% (10/50) were identified in the submandibular lymph nodes, 18% (9/50) in the mesenteric lymph nodes, 2% (1/50) in feces and 0% (0/50) in the mediastinal lymph nodes. The serotypes found were Salonella Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg and S. Derby with 5% (5% each). All strains showed resistance to at least one antimicrobial; 90% were resistant to four or more antimicrobials, and 15% were multidrug-resistant. Resistance to ciprofloxacin, tetracycline and nalidixic acid was particularly prevalent amongst the tested serovars. Here, we highlighted the impact of pigs in the epidemiological chain of salmonellosis in domestic animals and humans, as well as the high antimicrobial resistance rates of Salmonella strains, reinforcing the necessity for responsible use of antimicrobials for animals as an emergent One Health issue, and to keep these drugs for human therapy approaches.

• Serotyping Salmonella resistant serovars sorotipagem resistência antimicrobianos sorovares

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Guerra Filho J.B.P., Yamatogi R.S., Possebon F.S., Fernandes S.A., Tiba-Casas M.R., Lara G.H.B., Ribeiro M.G. & Pinto J.P.A.N. 2016. Frequency, serotyping and antimicrobial resistance pattern of Salmonella from feces and lymph nodes of pigs. [Isolamento, sorotipagem e padrões de resistência a antimicrobianos de Salmonella em fezes e linfonodos de suínos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1165-1170. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicna Veterinária e Zootecnia Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: josepaes@fmvz.unesp.br Nas últimas décadas, o aumento de cepas circulante de Salmonella concomitantemente a resistência microbiana tem despertado a preocupação dos órgãos de Saúde Pública. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi pesquisar a presença de Salmonella a partir de fezes (n=50), linfonodos mediastinos (n=50), mesentéricos (n=50) e submandibular (n=50) oriundos de um abatedouro suíno. As cepas isoladas foram sorotipadas e testadas quanto a resistência antimicrobiana. A presença de Salmonella isolada foram em 10% (20/200) do total de amostras, sendo 20% dos linfonodos submandibulares, 18% dos linfonodos mesentéricos e 2% das fezes. Os sorotipos encontrados foram S. Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg (5%) e S. Derby (5%). Todas a cepas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano testado, sendo 90% resistente pelo menos quatro antimicrobianos. Destes, 15% foram classificadas como multidrogas resistentes. Os antimicrobianos mais resistentes entre os sorovares isolados foram a ciprofloxacina, tetraciclina e o ácido nalidixico. A presença de cepas de Salmonella resistente a antimicrobianos na espécie suína tem gerado um grande impacto epidemiológico entre homem e animal, reforçando cada vez mais a necessidade do uso adequado de drogas principalmente relacionado com o tema “One Health”.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cruz T.F., Kanashiro T.M., Castro A.M.M.G., Baldin C.M., Richtzenhain L.J. & Araujo Jr J.P. 2016. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1171-1177. Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jpessoa@ibb.unesp.br, tfcruz@yahoo.com.br Few studies have described enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the detection of antibodies against porcine circovirus type 2 (PCV2) based on antigens produced in cell culture. Furthermore, few articles have described viral purification techniques for members of the family Circoviridae. This occurs because circoviruses are difficult to isolate, noncytopathogenic, and produce low viral titres in cell culture. Thus, for overcoming these difficulties in the cultivation of PCV2, this study aimed to develop a double-antibody sandwich ELISA based on the cell culture antigen PCV2b for the quantification of anti-PCV2 antibodies. A 20% and 50% discontinuous sucrose cushion was used for viral purification, which enabled the separation of cell culture proteins in the 20% sucrose cushion and a greater viral concentration in the 50% sucrose cushion. Following isopycnic centrifugation, PCV2 was concentrated in the band with density values from 1.330 to 1.395g/cm3. Viral purification was assessed using SDS-PAGE, indirect ELISA and electron microscopy. The standardised ELISA revealed a strong linear correlation (r= 0.826, p<0.001) when compared with a commercial ELISA kit. The assay exhibited low variability (inter-assay coefficient of variation of 4.24% and intra-assay of 1.80%) and excellent analytical specificity conferred by the capture antibody produced in rabbit. Thus, this ELISA is a rapid, specific and convenient method for the detection of antibodies against PCV2 in studies of experimental and natural infection, and in monitoring the response to vaccination on commercial farms.

• Immunosorbent assay centrifugation porcine circovirus type 2 antibody

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cruz T.F., Kanashiro T.M., Castro A.M.M.G., Baldin C.M., Richtzenhain L.J. & Araujo Jr J.P. 2016. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection. [Sandwich ELISA com duplo anticorpo baseado no circovirus suíno tipo 2 (PCV2) produzido em cultivo celular para detecção de anticorpos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1171-1177. Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jpessoa@ibb.unesp.br, tfcruz@yahoo.com.br Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p <0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Botoni L.S., Scherer C.B., Silva R.O., Coura F.M., Heinemann M.B., Paes-Leme F.O. & Costa-Val A.P. 2016. Prevalence and in vitro susceptibility of methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP) from skin and nostrils of dogs with superficial pyoderma. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1178-1180. Departamento de Clínica e Cirurgia, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antonio Carlos 6627, Cx. Postal 567, Belo Horizonte, MG 31270-010, Brazil. E-mail: adriane@ufmg.br In order to assess the prevalence of Methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius from skin and nostrils of dogs with pyoderma, to determine its in vitro susceptibility, and to correlate these data with the presence of the mecA gene, 43 dogs were selected. Samples were collected from secretion of their skin lesions and right nostril, cultured, and analyzed for phenotypic and genotypic characteristics of the bacteria studied. In 62 samples (91%) the microorganism was classified as S. pseudintermedius. The rate of resistance against antibiotics ranged from 7% (amikacin; 4/62) to 77% (sulfamethoxazole + trimethoprim; 48/62). Resistance against oxacillin was found in 34% of the samples (21/62). Twenty-five samples (37%) were strains that carried the mecA gene. A significant correlation (P<0.01) was found between presence of the mecA gene and oxacillin resistance. Seventeen dogs were mecA gene carriers, and 8 (47%) of them had the gene in the skin lesions and nostril. A significant correlation (P<0.01) was also observed between the presence of mecA gene in the skin lesions and nostrils. Oxacillin resistance in vitro can be safely used to indicate the presence of mecA gene in MRSP samples. The nostrils can be a reservoir of MRSP in dogs.

• Skin disease Staphylococcus pseudintermedius antibiotics oxacillin pele antibióticos oxacilina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Botoni L.S., Scherer C.B., Silva R.O., Coura F.M., Heinemann M.B., Paes-Leme F.O. & Costa-Val A.P. 2016. Prevalence and in vitro susceptibility of methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP) from skin and nostrils of dogs with superficial pyoderma. [Prevalência e suscetibilidade in vitro de Staphylococcus pseudintermedius resistente à meticilina (MRSP) oriundos de pele e narinas de cães com piodermite superficial.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1178-1180. Departamento de Clínica e Cirurgia, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antonio Carlos 6627, Cx. Postal 567, Belo Horizonte, MG 31270-010, Brazil. E-mail: adriane@ufmg.br Para acessar a prevalência de MRSP na pele e nas narinas de cães com piodermite superficial, determinar a suscetibilidade in vitro, e correlacionar estes dados com a presença do gene mecA, foram selecionados 43 cães. Amostras de lesões de pele e narinas foram coletadas, cultivadas, e analisadas fenotipica e genotipicamente. Em 62 amostras (91%), os microrganismos foram classificados como Staphylococcus pseudintermedius. A taxa de resistência a antibióticos variou entre 7% (amicacina; 4/62) e 77% (sulfamethoxazol + trimetoprim; 48/62). Resistência a oxacilina foi observada em 34% das amostras (21/62). Vinte e cinco amostras (37%), eram cepas portadoras do gene mecA. Correlação significativa (P<0,01) foi observada entre a presença do gene mecA e a resistência à oxacilina. Considerando os cães, 17 eram portadores de cepas com gene mecA e 8(47%) delas carreavam este gene nas amostras de lesão de pele e nas narinas. Correlação significativa (P>0,01) foi observada entre a presença do gene mecA nas lesões de pele e nas narinas. Sendo assim, resistência à oxacilina in vitro pode ser aferida com segurança para indicar a presença do gene mecA em amostras de MRSP, e as narinas podem constituir em um reservatório dos microorganismos em cães.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Monteiro K., Allendorf S.D., Vicente A.F., Appolinário C.M., Peres M.G., Cortez A., Heinemann M.B. & Megid J. 2016. Viral type characterization and clinical aspects of canine parvovirus in naturally infected dogs in São Paulo State, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1181-1185. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jane@fmvz.unesp.br Since the first isolation of canine parvovirus type 2 (CPV-2) in late 70’s new virus types as CPV-2a and CPV-2b have been emerged and becoming prevalent in natural canine population and more recently, a third subtype was identified , CPV-2c. The main purpose of this study was to detect and characterize canine parvovirus currently present in Central-West region of São Paulo state, in Brazil. Fecal samples were collected of vaccinated and non-vaccinated dogs, clinically suspected of having CPV infection brought to the Infectious Diseases Service, Veterinary Hospital of FMVZ-UNESP. All samples (n=30) were screening for canine parvovirus through hemagglutination test and those resulting as positive (n=20) were submitted to PCR and the products were subsequently sequenced for subtype characterization. Results were tested for association with age, hematological values, viral hemagglutination titers in the feces, vaccination status and survival. Leukopenia was found in all animals, death occurred in 30% of unvaccinated dogs and in 42% of vaccinated ones. In a total of 20 positive sequenced samples, 18 were classified as CPV-2b, one as CPV-2c, and one as CPV-2a, being CPV2a and CPV2c detected in unvaccinated puppies. Compared to the reference samples amino acid change at position 426 in those circling virus was identified. The study results demonstrate the predominance of CPV-2b and the presence of CPV-2a and CPV-2c in naturally infected, vaccinated and unvaccinated dogs in in São Paulo region.

• anine parvovirus parvovirus canino

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Monteiro K., Allendorf S.D., Vicente A.F., Appolinário C.M., Peres M.G., Cortez A., Heinemann M.B. & Megid J. 2016. Viral type characterization and clinical aspects of canine parvovirus in naturally infected dogs in São Paulo State, Brazil. [Caracterização viral e aspectos clínicos de parvovirose em cães naturalmente infectados no Estado de São Paulo.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1181-1185. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jane@fmvz.unesp.br Desde o primeiro isolamento do parvovirus canino tipo 2 (CPV-2) no final dos anos 70 novos subtipos virais como CPV-2a e CPV-2b surgiram e foram se tornando prevalentes na população canina; posteriormente um terceiro subtipo foi identificado, CPV- 2-C. O principal objetivo deste estudo foi detectar e caracterizar os subtipos de parvovírus canino atualmente presente na região Centro-Oeste do Estado de São Paulo-Brasil. Amostras de fezes foram coletadas de cães vacinados e não vacinados, atendidos no Serviço de Enfermidades Infecciosas dos Animais, Hospital Veterinário da FMVZ-UNESP, com suspeita clínica parvovirose . Todas as amostras (n = 30) foram submetidas teste de hemaglutinação para parvovirus canino e as positivas (n = 20) submetidas a PCR; os produtos amplificados foram subsequentemente sequenciados para caracterização do subtipo viral. Os resultados foram associados com a idade, os valores hematológicos, os títulos de hemaglutinação viral nas fezes, estado de vacinação e sobrevivência. A leucopenia foi encontrada em todos os animais; Obito foi observado em 30% dos cães não vacinados e 42% dos vacinados. Em um total de 20 amostras positivas sequenciadas, 18 foram classificadas como CPV-2b, uma como CPV-2c, e uma como CPV-2a. CPV 2a e CPV2c foram detectados em filhotes não vacinados. Em comparação com a amostra de referência foi evidenciada uma mudança de aminoácido na posição 426 nas amostras virais circulantes. Os resultados do estudo demonstram a predominância de CPV-2b e a presença de CPV-2a e CPV-2c em cães naturalmente infectados, vacinados e não vacinados na região de São Paulo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Fonseca L.A., Maia N.L., Girardi F.M.Carvalho Filho W.P., Pimentel F.G. & Braga F.R. 2016. [Evaluation of serum biochemical parameters in Amazon turtles (Podocnemis expansa) hatchlings kept in captivity.] Avaliação de parâmetros bioquímicos séricos em Tartarugas-da-Amazônia (Podocnemis expansa) mantidas em cativeiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1186-1189. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: leandroabreu@ufv.br Blood samples from the giant river turtle kept in captivity were analyzed in order to evaluate the serum biochemical constituents and relate to what has been reported by other researchers, beyond the purpose of generating further information, given the paucity of data involving this species. The turtle eggs were from the state of Tocantins and were obtained from direct sampling in their natural habitat. After being collected the eggs were kept in incubators and then the puppies were kept in tanks. Samples were collected after chemical restraint of these animals by intracardiac puncture or cardiocentesis. The samples were centrifuged to obtain serum. Biochemical analyzes were processed by kinetic and colorimetric methods, as described by the manufacturer, and the values obtained were: calcium 7.0+1.9mg/dL, phosphorus 2.8±1.2mg/dL, uric acid 1.8±0.8mg/dL, BUN 10.4+3.9mg/dL, alanine aminotransferase (AST) 75.5+33.6 IU/L, total protein 1.9±0.8g/dL, triglycerides 22.9+9.8mg/dL and cholesterol 45.3+19.7mg/dL. It was observed that the values of the evaluated blood components are similar to those found by other researchers in serum biochemical studies with samples of Podocnemis expansa. During this study we observed the paucity of published data on blood parameters of Podocnemis genus, especially P. expansa species, which confirmed the high relevance of the development of further research involving this topic.

• Podocnemis biochemistry giant river turtle bioquímica sérica Tartaruga-da-Amazônia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Fonseca L.A., Maia N.L., Girardi F.M.Carvalho Filho W.P., Pimentel F.G. & Braga F.R. 2016. [Evaluation of serum biochemical parameters in Amazon turtles (Podocnemis expansa) hatchlings kept in captivity.] Avaliação de parâmetros bioquímicos séricos em Tartarugas-da-Amazônia (Podocnemis expansa) mantidas em cativeiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1186-1189. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: leandroabreu@ufv.br Amostras de sangue de Tartaruga-da-Amazônia mantidas em cativeiro foram analisadas com o propósito de avaliar os constituintes bioquímicos séricos e de relacionar ao que já foi relatado por outros pesquisadores, além de gerar mais informações, tendo em vista a escassez de dados envolvendo a espécie estudada. Foram utilizados 35 animais, com idade entre 3 e 7 meses, os quais foram contidos fisicamente para coleta de sangue em tubo sem anticoagulante. As análises bioquímicas foram processadas através de métodos cinéticos (enzimas) e colorimétricos (demais análises), e os valores médios obtidos foram: cálcio 7,0+1,9mg/dL, fóforo 2,8+1,2mg/dL, ácido úrico 1,8+0,8mg/dL, uréia 10,4+3,9mg/dL, alanina aminotransferase (AST) 75,5+33,6 UI/L, proteína total 1,9+0,8g/dL, triglicerídeos 22,9+9,8mg/dL e colesterol 45,3+19,7mg/dL. Observou-se que os valores dos componentes séricos avaliados assemelham-se aos que foram encontrados por outros pesquisadores em estudos bioquímicos séricos com Podocnemis expansa e outras tartarugas de água doce. Importante ressaltar que, no decorrer deste estudo observou-se a escassez de dados publicados sobre parâmetros sanguíneos de tartarugas do gênero Podocnemis, especialmente a espécie Podocnemis expansa, o que corroborou a alta relevância do desenvolvimento de mais pesquisas que envolvam a questão.