PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pizzigatti D., Gonçalves D.S., Trentin T.C., Takahira R.K., Alves A.L.G., Rodrigues C.A., Watanabe M.J. & Hussni C.A. 2016. Thromboelastometric evaluation of horses submitted to experimental thrombosis and jugular thrombectomy. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):677-686. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-918, Brazil. E-mail: cahussni@fmvz.unesp.br Jugular thrombosis in horses occurs commonly in iatrogenic situations, secondary to endotoxemic clinical condition and disseminated vascular coagulation, potentially leading to death. Thus, hemostatic evaluation becomes necessary and extremely important for monitoring the risks of systemic hypercoagulability and for the efficiency of allopathic and surgical treatment. This paper describes the hemostatic behavior in experimental jugular thrombosis of ten healthy equines, subsequently submitted to two thrombectomy techniques and receiving heparin sodium as anti-rethrombosis therapy. These animals were evaluated for 20 days by thromboelastometry (TEM), platelet count, hematocrit and fibrinogen, at four moments: pre-induction to phlebitis (D0-MPF); three days after thrombophlebitis induction (D3-MFM); 6 days after, - moment of thrombophlebitis - (D9-MT); and 54 (D16) and 126 (D19) hours after thrombectomies (PTM). Thrombectomy was performed via a Vollmar Ring (group 1, n=5) and Fogarty catheter (group 2, n=5). All the animals received heparin (150 UI/kg, SC) every 12 hours, for ten days after the respective thrombectomies. Through the blood samples were evaluated TEM, activated partial thromboplastin time (aPTT) and prothrombin time (PT), dosing of fibrinogen, hematocrit and platelet count at the abovementioned moments. For comparison between groups and moments the t test was applied at 5% significance level. No significant difference was verified between treatment groups at any of the moments. There were reductions in clotting time (CT) and clot formation time (CFT), with increase in maximum lysis (ML) until the moment D9-MT. Evaluation through INTEM® reagent presented prolongations of CT and CFT with reduction of α angle and ML starting from D16 and D19. Similarly, aPTT presented significant differences between moments pre- (D0, 3 and 9) and post- (D16 and 19) anticoagulant and surgical treatment. The platelet numbers were diminished at moments D16 and D19. In evaluation with EXTEM® reagent, prolongation of CT and CFT occurred only between the moments D0 vs. D3 and vs. D9. O PT did not present significant differences. The results obtained demonstrate that experimental jugular thrombophlebitis leads to local clinical alterations, with impairment of tissue and of the extrinsic coagulation pathway (EXTEM®), but without evidence of systemic hypercoagulability status, since there was no increase of the alpha angle or maximum clot firmness (MCF). Furthermore, TEM was shown useful and more sensitive than conventional coagulation tests (PT, aPTT and fibrinogen) for the monitoring of anticoagulant therapy, as demonstrated in other works.

• Thrombosis jugular thrombectomy thromboelastometry thrombophlebitis Vollmar Ring Fogarty Catheter trombectomia jugular tromboelastometria tromboflebite jugular Anel de Vollmar Cateter de Fogarty

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pizzigatti D., Gonçalves D.S., Trentin T.C., Takahira R.K., Alves A.L.G., Rodrigues C.A., Watanabe M.J. & Hussni C.A. 2016. Thromboelastometric evaluation of horses submitted to experimental thrombosis and jugular thrombectomy. [Avaliação tromboelastométrica de equinos submetidos a trombose e trombectomia jugular experimental.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):677-686. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-918, Brazil. E-mail: cahussni@fmvz.unesp.br A trombose jugular nos equinos ocorre comumente em situações iatrogênicas, secundárias a quadros endotoxêmicos e a coagulação vascular disseminada, podendo levar ao óbito. Por isso, avaliação hemostática se faz necessária e de extrema importância para monitorar os riscos de hipercoagulabilidade sistêmica e também a eficiência do tratamento alopático e cirúrgico. Este trabalho descreve o comportamento hemostático na trombose jugular experimental de dez equinos hígidos, submetidos posteriormente a duas técnicas de trombectomia e recebendo heparina sódica como terapia anti retrombosante. Estes animais foram avaliados durante 20 dias por tromboelastometria (TEM), contagem de plaquetas, hematócrito e fibrinogênio, em quatro momentos: pré-indução à flebite (D0-MPF); três dias após a indução da tromboflebite (D3-MFM); 6 dias após, - momento de tromboflebite - (D9-MT); e 54 (D16) e 126 (D19) horas após as trombectomias (MPT). A trombectomia foi realizada com Anel de Vollmar (grupo 1, n=5) e cateter de Fogarty (grupo 2, n=5). Todos os animais receberam heparina (150 UI/Kg, SC) a cada 12 horas, durante dez dias após as respectivas trombectomias. Através de amostras de sangue, foram avaliadas a TEM, o tempo de tromboplastia parcial ativada (TTPa) e tempo de protrombina (TP), a dosagem de fibrinogênio, hematócrito e contagem de plaquetas nos momentos descritos acima. Para a comparação entre os grupos e momentos foi aplicado teste t, com nível de significância de 5%. Não foi verificada diferença significativa entre os grupos de tratamento em nenhum dos momentos. Houve redução do tempo de coagulação (CT) e do tempo de formação do coágulo (CFT), com aumento da lise máxima (LM) até o momento D9-MT. A avaliação com o reagente intem apresentou prolongamento do CT e do CFT e redução do ângulo α e da LM a partir do D16 e D19. Da mesma forma, o TTPa apresentou diferenças significativas entre os momentos pré (D0, 3 e 9) e pós (D16 e 19) tratamento cirúrgico e anticoagulante. Houve diminuição do número de plaquetas nos momentos D16 e D19. Na avaliação com reagente extem ocorreu apenas o prolongamento do CT e CFT entre os momentos D0 e o D3 e D9. O TP não apresentou diferenças significativas. Os resultados obtidos demonstram que a tromboflebite jugular experimental leva a alterações clínicas locais, com comprometimento tecidual e da via extrínseca da coagulação (extem), porém sem evidências de um estado sistêmico de hipercoagulabilidade, pois não houve aumento do ângulo alfa e da firmeza máxima do coágulo (MCF). Além disso, a TEM se mostrou útil e mais sensível que os testes convencionais de coagulação (TP, TTPa e fibrinogênio) para o acompanhamento da terapia anticoagulante, conforme demonstrado em outros trabalhos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Giglioti R., Guimarães S., Oliveira-Sequeira T.C.G., David E.B., Brito L.G., Huacca M.E.F., Chagas A.C.S. & Oliveira M.C.S. 2016. Proteolytic activity of excretory/secretory products of Cochliomyia hominivorax (Diptera: Calliphoridae). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):711-718. Embrapa Rondônia, Rodovia BR-364 Km 5,5, Porto Velho, RO 76815-800, Brazil. E-mail: luciana.gatto@embrapa.br The protein profiles and proteolytic activity of the excretory secretory products (E/SP) of the first (L1), second (L2) and third (L3) larval stages of Cochliomyia hominivorax were studied in the laboratory. Analysis on the E/SP protein profile was carried out using polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). The E/SP of each larval stage (L1, L2 and L3) treated with protease inhibitors, containing 30µg, 40µg and 50µg of protein, was applied to the 10% polyacrylamide gel. The proteolytic activity of the crude E/SP was analyzed in gels copolymerized with gelatin and by colorimetric assays using azocasein as a substrate, with the characterization of the proteases using synthetic inhibitors. Different protein profiles were observed for the larval instars, with L1 presenting the most complex profile. Nevertheless, various protein bands were observed that were common to all the larval instars. The E/SP of all the instars showed proteolytic activity on gelatin, evidenced by proteolysis zones, predominantly with apparently higher molecular masses in L1, while for L2 and L3 the proteolysis zones could also be observed in regions with lower masses. Tests with protease inhibitors using gelatin as substrate showed that the E/SP of larvae were mainly composed of serine proteases. Additionally, inhibition was observed in L2 E/SP treated previously with EDTA, an inhibitor of metalloproteases. The assays with azocasein revealed a gradual increase of proteolytic activity on this substrate with larval development progress, with the strongest inhibitions being observed after treatments with 3,4-dichloroisocoumarin (DCI) for E/SP of L1, L2 and L3. These results suggest that C. hominivorax larvae produce different proteases, a fact that can be related to the parasite’s vital processes for survival, such as penetration into the host’s tissues and nutrition during the larval stage.

• Cochliomyia hominivorax Diptera Calliphoridae myiasis screwworm proteases Diptera Calliphoridae miíases bicheira proteases

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Giglioti R., Guimarães S., Oliveira-Sequeira T.C.G., David E.B., Brito L.G., Huacca M.E.F., Chagas A.C.S. & Oliveira M.C.S. 2016. Proteolytic activity of excretory/secretory products of Cochliomyia hominivorax (Diptera: Calliphoridae). [Atividade proteolítica de produtos de excreção/secreção de Cochliomyia hominivorax (Diptera: Calliphoridae).] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):711-718. Embrapa Rondônia, Rodovia BR-364 Km 5,5, Porto Velho, RO 76815-800, Brazil. E-mail: luciana.gatto@embrapa.br Os perfis protéicos e a atividade proteolítica dos produtos de excreção/secreção (PE/S) das larvas de primeiro (L1), segundo (L2) e terceiro (L3) estágios de Cochliomyia hominivorax foram estudados em laboratório. Os perfis protéicos foram obtidos por eletroforese em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE). Os PE/S de cada fase larval (L1, L2 e L3), tratados com inibidores de proteases, contendo 30µg, 40µg e 50µg de proteína, foram aplicados em géis de poliacrilamida a 10%. A atividade proteolítica dos PE/S na sua forma nativa, foi analisada em géis co-polimerizados com gelatina e por testes colorimétricos usando a azocaseína como substrato, com a caracterização das proteases feita por meio de inibidores sintéticos. Diferentes perfis protéicos foram observados para os instares larvais, com L1 apresentando o perfil mais complexo. Apesar disso, foram observadas várias bandas protéicas comuns a todos os estágios larvais. Os PE/S de todos os instares mostraram atividade proteolítica sobre a gelatina, evidenciada por zonas de proteólise, com predominância de massas moleculares aparentes mais altas em L1, enquanto que para L2 e L3 as zonas de proteólise puderam ser observadas também em regiões de menores massas. Os testes com inibidores de proteases usando a gelatina como substrato mostraram que os PE/S de L1, L2 e L3 eram compostos principalmente de serina-proteases. Adicionalmente, inibição foi observada nos PE/S de L2 tratada previamente com EDTA, um inibidor de metalo-proteases. Os ensaios com a zocaseína revelaram um aumento gradual da atividade proteolítica sobre este substrato com o progresso do desenvolvimento larval, com a mais forte inibição sendo observada após o tratamento com 3,4 dicloroisocumarina (DCI) para os PE/S de L1, L2 e L3. Estes resultados sugerem que as larvas de C. hominivorax produzem diferentes proteases, fato que pode estar relacionado a processos vitais para a sobrevivência do parasita, tais como a penetração nos tecidos dos hospedeiros e nutrição durante os estágios larvais.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Nascimento E.M., Medeiros R.M.T., Simões S.V.D. & Riet-Correa F. 2016. [Ruminal indigestion and intestinal obstruction in cattle associated with consumption of Agave sisalana Perrine.] Compactação ruminal e obstrução intestinal em bovinos, associadas ao consumo de Agave sisalana Perrine (Agavaceae). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):719-723. Hospital Veterinário, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Patos, PB 58708-110, Brazil. E-mail: eduardoaquario@hotmail.com Indigestion due to compaction of the ruminal content is a digestive disorder resulting from low-quality forage intake, rich in lignin and with low levels of energy and digestible protein, with or without water restriction. The accumulation of plant residues rich in indigestible fibers can also lead to formation of phytobezoars, causing digestive disorders and intestinal obstructions. The objective of this paper was to describe the epidemiology and the clinical and pathological changes of an outbreak of indigestion and other digestive disorders in cattle fed Agave sisalana. The affected herd consisted of 22 adult cattle reared in a semi-extensive system, which ingested almost exclusively stalks of A. sisalana manually cut for two months. Six cows showed decreased appetite and rumination, abdominal distension, and reduced production of dried feces. One animal was referred to the Veterinary Hospital. The presumptive diagnosis of indigestion was made by the epidemiologic data, clinical signs, and laboratory evaluation. At necropsy, the rumen, reticulum and omasum were filled with fibrous and dried A. sisalana content. A viscous, greenish brownish content was present in the abomasum. Numerous phytobezoars were found in the pre-stomachs and abomasum measuring 4-12cm in diameter. One phytobezoar was partially obstructing the duodenum, with the cranial part of the organ filled with intestinal content, and the caudal portion was empty. It is concluded that the administration of A. sisalana stalks for long periods may cause indigestion due to ruminal compaction and formation of phytobezoars.

• Agave sisalana indigestion phytobezoars compactação fitobezoares

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Nascimento E.M., Medeiros R.M.T., Simões S.V.D. & Riet-Correa F. 2016. [Ruminal indigestion and intestinal obstruction in cattle associated with consumption of Agave sisalana Perrine.] Compactação ruminal e obstrução intestinal em bovinos, associadas ao consumo de Agave sisalana Perrine (Agavaceae). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):719-723. Hospital Veterinário, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Patos, PB 58708-110, Brazil. E-mail: eduardoaquario@hotmail.com A compactação dos pré-estômagos é um transtorno digestivo resultante da ingestão de forragem de baixa qualidade, rico em lignina e com baixos níveis de energia e proteína digerível, associada ou não a restrição hídrica. O acúmulo de vegetais ricos em fibras indigeríveis pode levar também a formação de fitobezoares, causando transtornos digestivos e obstruções intestinais. Objetivou-se com este trabalho descrever os aspectos epidemiológicos e as alterações clínico-patológicas de um surto de alterações digestórias em bovinos alimentados com Agave sisalana. O rebanho acometido era formado por 22 animais adultos, criados de forma semiextensiva, que, devido a escassez de forragem, receberam no cocho, quase que exclusivamente, durante dois meses, o caule do A. sisalana cortado manualmente. Seis vacas apresentaram diminuição do apetite, distensão abdominal, redução dos períodos de ruminação e da produção de fezes. Um animal foi encaminhado ao Hospital Veterinário da Universidade Federal de Campina Grande. O diagnóstico presuntivo de compactação ruminal e obstrução intestinal foi dado pela epidemiologia, sinais clínicos e análise de fluido ruminal. Na necropsia observou-se rúmen, retículo e omaso repletos, com conteúdo fibroso e ressecado constituído por fibras de A. sisalana. No abomaso observou-se a presença de conteúdo pastoso e esverdeado a acastanhado. Em todos os pré-estômagos e no abomaso havia fitobezoares, que mediam entre 4 e 12 cm de diâmetro. No duodeno um fitobezoar obstruía parcialmente a luz do órgão, com a porção anterior repleta de conteúdo e a posterior vazia. Conclui-se que a alimentação com caules de A. sisalana por longos períodos causa compactação de pre-estômagos e formação de fitobezoares.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pachaly J.R., Monteiro-Filho L.P.C., Gonçalves D.D. & Voltarelli-Pachaly E.M. 2016. Gyrostigma rhinocerontis (Diptera: Oestridae, Gasterophilinae) in white rhinoceroses (Ceratotherium simum) imported from South Africa: occurrence in Itatiba, São Paulo, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):749-752. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos, Universidade Paranaense, Praça Mascarenhas de Moraes 4282, Centro, Umuarama, PR 87502-210, Brazil. E-mail: pachaly@uol.com.br Fly larvae from the Gasterophilinae subfamily of the Oestridae family are parasites of domestic (equine) and wild (rhinos and equine) odd-hoofed ungulates (Perissodactyla). The gastric parasite of African Rhinos is Gyrostigma rhinocerontis (formerly Gyrostigma pavesii), which in its larva phase can be found in the feces of their hosts and can reach 40mm length. The adult is the largest fly in Africa, reaching 41mm long, with 71-mm wingspan. The Gyrostigma genus does not occur naturally in Brazil. There is one previous report of the occurrence of its larvae in the feces of a white rhino brought from South Africa in the 1990’s, which was housed in a zoo located in Rio Grande do Sul. The present paper furnishes data from a zoo of the city of Itatiba, São Paulo state, Brazil, where Gyrostigma rhinocerontis larvae were found in 2005 in the feces of a group of white rhinos (Ceratotherium simum) legally imported from South Africa. The rhinos were kept in a breeding and preservation farm. This paper also reports the measures taken to control the case and avoid the dissemination of the parasite, calling attention to the fact of globalization, which allows international and intercontinental transit of wild animals with potential risks of adaptation of exotic parasites to new ecosystems.

• Gyrostigma rhinocerontis Diptera Oestridae Gasterophilinae rhinoceros Ceratotherium simum rinoceronte-branco

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pachaly J.R., Monteiro-Filho L.P.C., Gonçalves D.D. & Voltarelli-Pachaly E.M. 2016. Gyrostigma rhinocerontis (Diptera: Oestridae, Gasterophilinae) in white rhinoceroses (Ceratotherium simum) imported from South Africa: occurrence in Itatiba, São Paulo, Brazil. [Gyrostigma rhinocerontis (Diptera: Oestridae, Gasterophilinae) em rinocerontes-brancos (Ceratotherium simum) importados da África do Sul: ocorrência em Itatiba, São Paulo.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):749-752. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos, Universidade Paranaense, Praça Mascarenhas de Moraes 4282, Centro, Umuarama, PR 87502-210, Brazil. E-mail: pachaly@uol.com.br As larvas dos dípteros da subfamília Gasterophilinae da família Oestridae parasitam ungulados perissodáctilos, tanto domésticos (equídeos) quanto selvagens (rinocerontes e equídeos). O parasito gástrico dos rinocerontes africanos é Gyrostigma rhinocerontis (anteriormente Gyrostigma pavesii), que na fase larval pode ser encontrada nas fezes dos hospedeiros, e chega a medir 40mm de comprimento. O adulto é a maior mosca daquele continente, atingindo até 41mm de comprimento, e envergadura de 71 mm. O gênero Gyrostigma não ocorre naturalmente no Brasil, onde anteriormente existia somente um relato do achado de larvas, nas fezes de um rinoceronte-branco oriundo da África do Sul nos anos 90 do século XX, e albergado num zoológico localizado no Rio Grande do Sul. Este artigo apresenta dados sobre o achado, em um zoológico no município de Itatiba, Estado de São Paulo, Brasil, de larvas de Gyrostigma rhinocerontis nas fezes de um grupo de rinocerontes-brancos (Ceratotherium simum) importados legalmente da África do Sul, onde eram mantidos em uma fazenda de preservação com criação manejada, em 2005. São relatadas também as medidas tomadas para controle do caso e prevenção da disseminação do parasito, e se discutem os riscos da globalização, que viabiliza o trânsito internacional e intercontinental de animais selvagens, com riscos potenciais de adaptação de parasitos exóticos a novos ecossistemas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pöppl A.G., Valle S.C., González F.H.D., Kucharski L.C. & Da Silva R.S.M. 2016. Insulin binding characteristics in canine muscle tissue: effects of the estrous cycle phases. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):761-766. Setor de Clínica de Pequenos Animais, Hospital de Clínicas Veterinárias. Departamento de Medicina Animal, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 9090, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: alan.poppl@ufrgs.br Hormonal fluctuations during the different estrous cycle are a well-recognized cause of insulin resistance in bitches, and little is known about insulin receptor binding or post-binding defects associated with insulin resistance in dogs. To evaluate insulin binding characteristics in muscle tissue of bitches during the estrous cycle, 17 owned bitches were used in the study (six in anestrus, five in estrus, and six in diestrus). An intravenous glucose tolerance test (IVGTT) was performed in all patients by means of injection of 1mL/kg of a glucose 50% solution (500mg/kg), with blood sample collection for glucose determination at 0, 3, 5, 7, 15, 30, 45 and 60 minutes after glucose infusion. Muscle samples, taken after spaying surgery, were immediately frozen in liquid nitrogen and then stored at -80 ºC until the membranes were prepared by sequential centrifugation after being homogenized. For binding studies, membranes were incubated in the presence of 20,000cpm of human 125I-insulin and in increasing concentrations of unlabeled human regular insulin for cold saturation. The IVGTT showed no differences among bitches during the estrous cycle regarding baseline glycemia or glycemic response after glucose infusion. Two insulin binding sites - high-affinity and low-affinity ones - were detected by Scatchard analysis, and significant statistical differences were observed in the dissociation constant (Kd1) and maximum binding capacity (Bmax1) of the high-affinity binding sites. The Kd1 for the anestrus group (6.54±2.77nM/mg of protein) was smaller (P<0.001) than for the estrus (28.54±6.94nM/mg of protein) and diestrus (15.56±3.88nM/mg of protein) groups. Bmax1 in the estrus (0.83±0.42nM/mg of protein) and diestrus (1.24±0.24nM/mg of protein) groups were also higher (P<0.001) than the values observed in anestrus (0.35±0.06nM/mg of protein). These results indicate modulation of insulin binding characteristics during different phases of the estrous cycle in dogs, showing that muscle insulin binding affinity for its receptor is reduced during estrus and diestrus. However, this poor hormone-receptor affinity is compensated for by a greater total binding capacity, once there is no difference in patients’ glycemic response after an intravenous glucose load.

• Muscle nsulin sensitivity tyrosine kinase strous cycle diabetes mellitus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pöppl A.G., Valle S.C., González F.H.D., Kucharski L.C. & Da Silva R.S.M. 2016. Insulin binding characteristics in canine muscle tissue: effects of the estrous cycle phases. [Características de ligação da insulina no tecido muscular canino: efeitos da fase do ciclo estral.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):761-766. Setor de Clínica de Pequenos Animais, Hospital de Clínicas Veterinárias. Departamento de Medicina Animal, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 9090, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: alan.poppl@ufrgs.br As flutuações hormonais durante as diferentes fases do ciclo estral são uma causa importante de resistência insulínica em fêmeas caninas, e poucas informações são conhecidas sobre defeitos na ligação da insulina ao seu receptor, ou defeitos pós-receptor associados com resistência à insulina em cães. Para avaliar as características da ligação insulina-receptor no tecido muscular de cadelas durante o ciclo estral, dezessete pacientes foram utilizadas no estudo (seis em anestro, cinco em estro e seis em diestro). Um teste de tolerância à glicose intravenosa (IVGTT) foi realizado em todas as pacientes por meio da infusão de 1mL/kg de uma solução de glicose 50% (500mg/kg), com coletas de sangue para determinação de glicemia nos tempos 0, 3, 5, 7, 15, 30, 45 e 60 minutos da injeção de glicose. Amostras de tecido muscular foram coletadas durante ovariohisterectomia, imediatamente congeladas em nitrogênio líquido, e posteriormente armazenadas a -80°C até a preparação das membranas por meio de homogeneização e centrifugação sequencial. Para os experimentos de ligação hormônio-receptor, as membranas foram incubadas na presença de 20.000cpm de 125I-insulina humana, e concentrações crescentes de insulina regular humana não marcada para saturação fria. O IVGTT não mostrou diferenças entre as pacientes em diferentes fases do ciclo estral com relação a glicemia basal, ou na resposta glicêmica após infusão de glicose nos tempos estudados. Dois sítios de ligação da insulina, um de alta-afinidade, e outro de baixa afinidade, foram detectados pela análise de Scatchard, e diferenças significativas foram detectadas na constante de dissociação (Kd1) e capacidade de ligação máxima (Bmax1) dos sítios de ligação de alta-afinidade. O Kd1 para o grupo anestro (6,54±2,77nM/mg de proteína) foi menor (P<0,001) que os Kd1 dos grupos estro (28,54±6,94 nM/mg de proteína) e diestro (15,56±3,88nM/mg de proteína). Os Bmax1 dos grupos estro (0,83±0,42nM/mg de proteína) e diestro (1,24±0,24nM/mg de proteína) também foram maiores que os valores encontrados no grupo anestro (0,35±0,06nM/mg de proteína). Estes resultados demonstram uma modulação das características de ligação da insulina nas diferentes fases do ciclo estral em cães, evidenciando uma menor afinidade de ligação da insulina ao seu receptor no tecido muscular durante o estro e diestro. Contudo, esta menor afinidade de ligação hormônio-receptor é compensada por uma maior capacidade de ligação, o que fica também evidenciado pela ausência de diferenças na resposta glicêmica das pacientes após um desafio com glicose por via endovenosa.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Sousa P.C., Santos E.A.A., Silva A.M., Bezerra J.A.B., Souza A.L.P., Lima G.L., Oliveira M.F. & Silva A.R. 2016. Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):767-774. Laboratory of Animal Germoplasm Conservation, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, BR-110 Km 47, Presidente Costa e Silva, Mossoró, RN 599625-900, Brazil. E-mail: legio2000@yahoo.com The aim of the study was to cryopreserve the semen of six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) in Tris-yolk and glycerol diluent, and to determine the damage caused by the freezing-thawing process, using fluorescent markers and ultrastructural analysis. Semen samples (n=11) collected from 4 adult six-banded armadillos by electroejaculation were cryopreserved in Tris diluent plus 20% egg yolk and 3% glycerol, in a fast freezing curve. Classical analysis of samples was performed after dilution, refrigeration and thawing, followed by fluorescence analysis, using a combination of fluorescent probes to assess membrane integrity (propidium iodide - PI and Hoechst - H342), and mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker Red®). We also used the ultrastructural analysis to verify possible morphological alterations caused by cryoinjuries. When compared with fresh samples, we verified a significant decline in all the armadillos’ semen parameters after thawing, in which only 6.1% motile sperm were found. However, the percentage of sperm which remained with viable (13%) and functional (24.7%) membranes after thawing suggests that some cells could be live but immotile. Analysis using fluorescent markers revealed that the mitochondria of armadillos’ sperm is highly sensible to the freezing protocol and the findings through ultrastructure analysis proved this statement. Additionally, the images obtained by transmission electron microscopy revealed that frozen-thawed sperm presented damaged plasma membrane, nuclear modifications as changes in chromatin and acrossomal changes relative to sperm capacitation. In conclusion, this study is the first attempt to cryopreserve the semen of an armadillo species, and to help us to identify critical points on the freezing-thawing procedure in order to improve the protocol.

• Sperm armadillo Euphractus sexcinctus cryopreservation semen mitochondrial tatu-peba criopreservação sêmen mitocondria

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Sousa P.C., Santos E.A.A., Silva A.M., Bezerra J.A.B., Souza A.L.P., Lima G.L., Oliveira M.F. & Silva A.R. 2016. Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation. [Identificação de danos ultraestruturais e funcionais em espermatozoides de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) oriundos da criopreservação.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):767-774. Laboratory of Animal Germoplasm Conservation, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, BR-110 Km 47, Presidente Costa e Silva, Mossoró, RN 599625-900, Brazil. E-mail: legio2000@yahoo.com O objetivo deste estudo foi criopreservar o sêmen de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) em diluente Tris-gema e glicerol, e determinar os danos causados pelo processo de congelação-descongelação, utilizando marcadores fluorescentes e análise ultraestrutural. As amostras de sêmen (n=11) coletadas de 4 tatus-peba adultos por eletroejaculação foram criopreservadas em diluente Tris acrescido de 20% de gema de ovo e 3% de glicerol, em curva rápida de congelação. A análise clássica das amostras foi realizada após a diluição, refrigeração e descongelação, seguida por análise de fluorescência, utilizando uma combinação de sondas fluorescentes para avaliar a integridade da membrana (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H342), e a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker RED®). Foi também utilizada a análise ultraestrutural para verificar possíveis alterações morfológicas causadas pela crioinjúria. Quando comparadas com as amostras a fresco, verificou-se uma queda significativa em todos os parâmetros seminais dos tatus após a descongelação, em que apenas 6,1% de espermatozoides móveis foram encontrados. No entanto, o percentual de espermatozoides que permaneceu com membrana viável (13%) e funcional (24,7%) após a descongelação sugere que algumas células podem estar vivas, mas imóveis. Análises utilizando marcadores fluorescentes revelaram que as mitocôndrias dos espermatozoides de tatus são altamente sensíveis ao protocolo de congelação e os achados através da análise ultraestrutural comprovaram esta afirmação. Além disso, as imagens obtidas por microscopia eletrônica de transmissão revelaram que espermatozoides congelados-descongelados apresentaram membranas plasmáticas danificadas, modificações nucleares como alterações na cromatina, e alterações acrossomais relativas à capacitação espermática. Em conclusão, este estudo é a primeira tentativa de criopreservação de sêmen em uma espécie de tatu, e nos auxiliou a identificar pontos críticos no processo de congelação-descongelação, a fim de melhorar o protocolo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Vannucchi C.I., Lúcio C.F., Regazzi F.M., Angrimani D.S.R., Brito M.M. & Abreu R.A. 2016. [Plasmatic protein profile of pregnant and non-pregnant bitches.] Perfil de proteínas plasmáticas em cadelas gestantes e não gestantes. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):781-786. Departamento de Reprodução Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Avenida Prof. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: cacavann@usp.br The study of the organic interaction and physiological adaptations during pregnancy is of utmost importance for clinical evaluation and diagnosis of pathological conditions of pregnant bitches. The aim of the present study was to compare the serum protein profile (total protein, albumin, a1, a2, b and g globulin) of pregnant and diestrous bitches. For this purpose, 40 healthy 2 to7-year-old Great Dane bitches were used. The bitches were allocated in two experimental groups: Non-pregnant group (NP; n=20) and pregnant group (P; n=20). From each female, blood was drawn weekly during 9 weeks, from the diestrous onset until the beginning of anestrus or parturition, respectively from NP and P groups. The concentration of total protein, albumin and a1, a2, b and g globulins were determined from serum samples. No statistical difference was found for total protein between 1st and 6th weeks of pregnancy or diestrus. In both groups, there was a progressive decline in total protein concentration. At the end of pregnancy (7th to 9th week), a significant increase in total protein was verified, suggesting an anabolic process. Albumin concentration decreased between the 1st and 9th week in both groups, however, more markedly in the P group (with significant difference between groups at 7th, 8th and 9th week). The levels of &#945;1 globulin in pregnant bitches increased significantly from the 2nd week on. Statistical difference was observed between groups only at the 8th and 9th week, during which a preparatory phase for parturition occurs. A significant rise in &#945;2 globulin was shown between the 2nd and 3rd week of gestation, however without difference from the NP group. There was significant difference for &#945;2 globulin between groups at the 4th, 5th, 6th, 8th and 9th week. Serum concentration of b globulin in diestrous bitches was superior than pregnant bitches at the 2nd, 4th and 7th week. During early gestation (1st to 3rd week) there was a decrease in g globulin, simultaneously to the preimplantation period and formation of implantation sites. An increase in g globulin was shown between the 8th and 9th week in pregnant bitches, possibly due to the increase in immunoglobulin synthesis targeting the mammary gland to form the colostrum. In conclusion, markedly changes in protein profile occur during gestation. It was possible to state different biological function of blood proteins in pregnant and diestrous bitches. The determined proteins are enrolled in the inflammatory stimulus during gestation, as well as in the hormonal regulatory mechanisms and maternal preparatory process to lactation.

• Protein albumin globulin pregnancy diestrus proteína total albumina globulina gestação diestro

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Vannucchi C.I., Lúcio C.F., Regazzi F.M., Angrimani D.S.R., Brito M.M. & Abreu R.A. 2016. [Plasmatic protein profile of pregnant and non-pregnant bitches.] Perfil de proteínas plasmáticas em cadelas gestantes e não gestantes. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):781-786. Departamento de Reprodução Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Avenida Prof. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: cacavann@usp.br O estudo das interações orgânicas da gestação e as mudanças fisiológicas que estão ocorrendo nesta fase são de extrema importância para a avaliação clínica da fêmea gestante ou para estabelecer o diagnóstico de processos patológicos em andamento. O objetivo do presente estudo foi comparar o perfil das diversas proteínas sanguíneas (frações protéicas do soro - albumina, a1, a2, b, g globulinas e proteína total) durante o período gestacional e no diestro em cadelas. Foram utilizadas 40 fêmeas caninas da raça Dogue Alemão, em idade variando entre 2 a 7 anos, clinicamente saudáveis. Os animais foram separados em dois grupos, denominados Grupo não gestante (NG) e Grupo gestante (G), constituídos por 20 fêmeas em diestro e 20 fêmeas gestantes, respectivamente. Preconizou-se colheita de sangue semanalmente de cada animal durante 9 semanas. Nas fêmeas do grupo NG, as amostras foram colhidas a partir do início do diestro, até a detecção do início do anestro; no grupo G, as amostras foram colhidas do início do diestro até o momento da parição. A partir do soro sanguíneo, foram determinadas as concentrações de proteína total, albumina, a1, a2, b e g globulinas. Não houve diferença significativa quanto aos resultados de proteína sérica total entre a 1ª e 6ª semanas de gestação e diestro, havendo decréscimo gradual em ambos grupos. Já ao final da gestação (entre a 7ª e 9ª semanas), houve acréscimo significativo dos valores de proteína total, sugerindo ação anabólica. Os níveis de albumina sofreram queda da 1ª a 9ª semana, tanto no grupo gestante, como não-gestante, com diferença estatística entre os dois grupos na 7ª, 8ª e 9ª semanas. As concentrações de &#945;1 globulina nas fêmeas gestantes sofreram acréscimo significativo a partir da 2ª semana, contudo, diferença estatística entre os grupos NG e G ocorreu somente na 8ª e 9ª semanas, coincidindo com a fase de preparação à parição. Houve aumento no perfil de &#945;2 globulina entre a 2ª e 3ª semanas de gestação, porém tais valores não diferiram das fêmeas em diestro. Diferença significativa de &#945;2 globulina foi observada apenas durante a 4ª, 5ª, 6ª, 8ª e 9ª semanas entre os dois grupos avaliados. As concentrações séricas de &#946; globulina nas cadelas não-gestantes foi superior às das fêmeas gestantes durante a 2ª, 4ª e 7ª semanas. Durante o primeiro terço da gestação (1ª a 3ª semana), foi observado queda dos valores de &#947; globulina, coincidente ao período pré implantacional e durante a formação dos sítios de implantação. Entre a 8ª e 9ª semanas de gestação, houve acréscimo significativo de &#947; globulina, possivelmente conseqüente ao aumento da produção de imunoglobulinas direcionadas à glândula mamária, como constituinte do colostro. Em conclusão, as proteínas alteram-se de forma evidente durante o período de gestação. Foi possível inferir diferenças nas funções biológicas das proteínas sanguíneas em cadelas gestantes e não gestantes. As proteínas determinadas estão envolvidas com o estímulo inflamatório durante a gestação, além dos mecanismos de regulação hormonal e preparação do organismo materno à lactação.

Abstract in English:

ABTSRACT.- Olurin K.B., Mbaka G.O. & Agbato O.A. 2016. Histopathological effect of sub-lethal concentration of aluminum phosphide (phostoxin) on Clarias gariepinus juveniles. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):574-580. Department of Anatomy, Lagos State University College of Medicine, Ikeja, Lagos, Nigeria. E-mail: mbaaka2gm@gmail.com The study evaluated the effect of sub-lethal concentration of phostoxin on Clarias gariepinus juveniles. C. gariepinus juveniles belonging to the same cohort (40.1±1.2g; 18.1±1.1cm) from a commercial fish farm were randomly placed ten in each of 15 plastic tanks containing 15 liters of water. They were exposed for 96 hrs to three sub-lethal concentrations (treatments) of phostoxin (0.125, 0.250, 0.5mg L-1) and a phostoxin free control. At the end of 96 hrs exposure, they were dissected and the tissues need for histopathology removed and fixed in Bouin’s fluid. The gill filament exhibited fusion at the secondary lamella that was progressive with concentration. At the highest concentration of exposure, the secondary lamellae showed marked pyknotic and necrotic changes characterized by epithelia detachment. The hepatic tissue showed mild inflammatory changes at lower concentrations while at the highest concentration of exposure there was marked inflammation with observed hydropic degeneration. In the kidney, an inflammatory change was only observed in the interstices at the highest dose of exposure with the convoluted tubules showing partial shrinkage. Phostoxin showed to have significantly caused alterations in cyto-architecture of the gills and to a considerable extent liver and kidney of C. gariepinus.

• Phostoxin Clarias gariepinus fostoxina

Abstract in Portuguese:

ABTSRACT.- Olurin K.B., Mbaka G.O. & Agbato O.A. 2016. Histopathological effect of sub-lethal concentration of aluminum phosphide (phostoxin) on Clarias gariepinus juveniles. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):574-580. Department of Anatomy, Lagos State University College of Medicine, Ikeja, Lagos, Nigeria. E-mail: mbaaka2gm@gmail.com The study evaluated the effect of sub-lethal concentration of phostoxin on Clarias gariepinus juveniles. C. gariepinus juveniles belonging to the same cohort (40.1±1.2g; 18.1±1.1cm) from a commercial fish farm were randomly placed ten in each of 15 plastic tanks containing 15 liters of water. They were exposed for 96 hrs to three sub-lethal concentrations (treatments) of phostoxin (0.125, 0.250, 0.5mg L-1) and a phostoxin free control. At the end of 96 hrs exposure, they were dissected and the tissues need for histopathology removed and fixed in Bouin’s fluid. The gill filament exhibited fusion at the secondary lamella that was progressive with concentration. At the highest concentration of exposure, the secondary lamellae showed marked pyknotic and necrotic changes characterized by epithelia detachment. The hepatic tissue showed mild inflammatory changes at lower concentrations while at the highest concentration of exposure there was marked inflammation with observed hydropic degeneration. In the kidney, an inflammatory change was only observed in the interstices at the highest dose of exposure with the convoluted tubules showing partial shrinkage. Phostoxin showed to have significantly caused alterations in cyto-architecture of the gills and to a considerable extent liver and kidney of C. gariepinus.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Hvenegaard A.P., Barros P.S.M., Safatle A.M.V., Góes A.C.A., Eyherabide A.R. & Miguel A.C.O. 2016. [Molecular evaluation of the anterior lens capsule of older dogs suffering from high risk cataracts.] Avaliação da composição molecular da cápsula anterior da lente de cães idosos com catarata de alto risco. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):611-616. Serviço de Oftalmologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: ana6113@usp.br Nowadays, the anterior lens capsule and its epithelium have been being frequently studied aiming to reduce the incidence of posterior lens capsule opacity, a complication that frequently occurs after surgical removal of cataracts, due to epithelium cells differentiation and migration to the posterior pole. The objective of this study was to evaluate by histochemistry (PAS and picrosirius red) analysis two important molecular components of the anterior lens capsule (proteoglycans and type IV collagen) in older diabetic and non-diabetic dogs, with diabetic and hypermature cataracts, after phacoemulsification surgery utilizing 0.1% trypan blue or not. Twenty seven dogs, including 21 female and 6 male dogs, with ages varying from 8 to 12 years old (mean = 9.6 yo) of different breeds were studied. The animals were divided into 2 groups: GC (hypermature cataracts) and GCD (diabetic cataracts). Results showed that, besides their different pathophysiologies, both types of capsules studied (diabetic and hypermature ones) presented the same molecular composition of proteoglycans and type IV collagen, since no statistical significant differences were observed. In addition, 0.1% trypan blue was not capable to induce any other evident alteration for the samples. In conclusion, our findings suggest that, if the results consist in alteration induced by the aggressive metabolism of the diabetic cataract or the chronicity of the hypermature one, it is of the same intensity and independent of the use of 0.1% trypan blue. It is also possible to suggest that this alteration must be capable to compromise lens epithelium cell metabolism, which should probably favour future lens posterior capsule studies.

• Lens cataracts lente catarata

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Hvenegaard A.P., Barros P.S.M., Safatle A.M.V., Góes A.C.A., Eyherabide A.R. & Miguel A.C.O. 2016. [Molecular evaluation of the anterior lens capsule of older dogs suffering from high risk cataracts.] Avaliação da composição molecular da cápsula anterior da lente de cães idosos com catarata de alto risco. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):611-616. Serviço de Oftalmologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: ana6113@usp.br Atualmente, a cápsula anterior e o epitélio da lente tem sido cada vez mais estudados, com o intuito de reduzir as possíveis complicações do pós-operatório da remoção da catarata, tal como a opacidade da cápsula posterior, alteração ocasionada principalmente pela diferenciação e migração das células do epitélio lenticular para a cápsula posterior da lente. O objetivo deste estudo foi analisar a composição molecular da cápsula anterior da lente pela técnica histoquímica de PAS (avaliação de proteoglicanos) e picrosirius red (avaliação de colágeno IV), em cães idosos com catarata diabética e não diabética do tipo hipermadura, submetidos ao uso ou não de azul de tripano a 0,1 % durante a facoemulsificação. Vinte e sete cães foram estudados, incluindo 21 fêmeas e 6 machos, de 8 a 12 anos de idade (média = 9,6 anos), de diversas raças e divididos em 2 grupos: GC (catarata hipermadura) e GCD (catarata diabética). Os resultados das análises realizadas mostraram que ambas as amostras, tanto as provenientes das cataratas hipermaduras, quanto das diabéticas, apresentam semelhante composição molecular de proteoglicanos e colágeno IV e isto independente da utilização de azul de tripano a 0,1 %. Conclui-se, portanto, que se os resultados obtidos forem decorrentes de alterações provocadas pelo rápido metabolismo da catarata diabética e pela cronicidade da catarata hipermadura sugere-se que o comprometimento da estrutura capsular seja de intensidade equivalente e, por consequência, que isto também possa prejudicar o metabolismo das células do epitélio anterior da lente, diminuindo assim a incidência da opacidade da cápsula posterior de cães com catarata diabética e hipermadura submetidos à facoemulsificação.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Henriques L.C.S., Gregory L., Rizzo H., Hasegawa M.Y. & Meira Jr E.B.S. 2016. [Evaluation of the renal function in aging Santa Ines ewes.] Avaliação dos fatores etários sobre a função renal de ovelhas Santa Inês. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):642-646. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: lgregory@usp.br This study evaluated kidney function of healthy Santa Inês ewes, bred in São Paulo State. The aim of this paper was to establish standard reference values and stipulate value variation caused by age group factor. We determined seric and urinary levels of urea, creatinine, sodium and potassium, and urinary GGT from 128 ewes, divided into 4 groups according to age. Also urinalysis was made in 128 urine samples. No significant statistical difference was found regarding density values between all groups, although there was an increase in urea values, creatinine and sodium, and an decrease in urinary proteins and GGT in group 2, 3 and 4 older than group1. In relation to the seric parameters, there was significative statistical difference in urea and creatinine values between the groups, as an increase in urea and creatinine. Potassium decreased in the older groups 2, 3 and 4. Evaluating the results obtained for renal function, we found that the mean values of density were 1.03±0.01, pH 7.1±1.35, urea (mg/dL) 1342±1085, creatinin 42.39±23,36, total protein (g/dL) 5.61±2.88, GGT (U/L) 1.44±1.31, sodium and potassium (mmol/L) were 15.93±20.13 and 240±117 respectively. In the serum medium values were: urea (mg/dL) 32.33±19.81, creatinine 1.22±0.20, sodium and potassium (mmol/L) 145.7±8.8 and 5.5±1.30 respectively.

• Kidney function urea creatinin função renal ureia creatinina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Henriques L.C.S., Gregory L., Rizzo H., Hasegawa M.Y. & Meira Jr E.B.S. 2016. [Evaluation of the renal function in aging Santa Ines ewes.] Avaliação dos fatores etários sobre a função renal de ovelhas Santa Inês. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):642-646. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: lgregory@usp.br Este estudo avaliou a função renal de fêmeas ovinas hígidas da raça Santa Inês, criadas no Estado de São Paulo, com o objetivo de estabelecer valores de referência, além de determinar possíveis variações dos valores de seus parâmetros causados por fatores etários. Foram determinados os valores de ureia, creatinina, sódio e potássio séricos e urinários, e os valores de GGT urinário de 128 animais, divididos em 4 grupos de acordo com a idade. Foi realizada, também a urinálise das 128 amostras de urina. Não foi observada diferença significativa dos valores de densidade entre todos os grupos. Entretanto, constatou-se aumento de valores de ureia, creatinina, sódio e diminuição de proteínas e GGT urinários nos grupos 2, 3 e 4 que eram mais velhos do que o grupo 1. Em relação aos parâmetros séricos, observou-se diferença significativa dos valores de ureia e creatinina entre os grupos, pois uréia e creatinina aumentaram e potássio diminuiu nos animais do grupo 2, 3 e 4 que eram mais velhos. Avaliando-se os resultados obtidos para os exames da função renal, verificou-se que os valores médios na urina da densidade foi de 1,03±0,01; pH 7,71±1,35; ureia em mg/dL foi 1342±1085; de creatinina 42,39±23,36; de proteínas totais em g/dL foi de 5,61±2,88; GGT em U/L foi de 1,44±1,31; sódio e potássio em mmol/L foi de 15,93±20,13 e 240±117 respectivamente. No soro verificou-se que os valores médios foram: de ureia em mg/dL 32,33±19,81; de creatinina 1,22±0,20; de sódio e potássio em mmol/L foram de 145,7±8,8 e 5,5±1,30 respectivamente.