PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

Canine leishmaniasis (CanL) is a multifaceted disease triggered by the protozoan Leishmania infantum, characterized by diverse clinical presentations, including osteoarticular complications. Immune-mediated joint diseases invariably initiate at the synovial membrane, implicating its pivotal role in arthritis pathogenesis. This study aimed to investigate the influence of natural L. infantum infection on synovial fluid characteristics and the expression of immune markers, including TLR-2, FOXP3, and COX-2, in the synovial membrane. Twenty naturally infected dogs (NID) with L. infantum were sourced from the Zoonosis Surveillance Unit (ZSU). Clinical-orthopedic assessments were conducted, encompassing lameness, joint edema, crepitus, patellar luxation, and the drawer test. Synovial fluid (SF) parameters, including volume, appearance, viscosity, total nucleated cell count (TNC), neutrophil count, and total protein (TP) content, were determined. After anesthesia and euthanasia, synovial membrane specimens were obtained. SF protein concentrations categorized dogs into three groups: GI (2 to 2.5g/dL), GII (2.5 to 6.0g/dL), and GIII (>6g/dL). Inflammatory infiltrates and synovial membrane changes were assessed, and immunohistochemistry evaluated TLR-2, FOXP3, and COX-2 marker expressions. Clinical evaluations revealed various osteoarticular abnormalities in NID dogs, including lameness (55%), joint edema (25%), crepitus (30%), patellar luxation (20%), and positive drawer test (25%). Post mortem examinations revealed bilateral subchondral bone, meniscus, and trochlea erosion in 30% of cases. Amastigotes of L. infantum were identified extracellularly and within macrophages (60%). An inflammatory infiltrate was predominant in 70% of dogs, with varying intensity among the groups. Mononuclear cells, chiefly macrophages and lymphocytes, and neutrophils comprised the infiltrate. TLR-2 and COX-2 expression levels were elevated in GIII compared to GII and GI. Conversely, FOXP3 showed moderate expression in GI and minimal expression in GII and GIII. This study underscores the contributory role of L. infantum infection in the development of joint lesions in CanL. Additionally, alterations in the expression of immune markers TLR2, FOXP3, and COX2 within the synovial membrane imply the perpetuation and exacerbation of the inflammatory processes, shedding light on the intricate pathogenesis of CanL-induced arthritis.

• Canine leishmaniasis synovial fluid synovial membrane TLR2 FOXP3 dogs

Abstract in Portuguese:

A leishmaniose canina (LC) é uma doença causada pelo protozoário Leishmania infantum com diversas manifestações clínicas, incluindo alterações osteoarticulares. A membrana sinovial é o local inicial de eventos patogênicos em todos os tipos de doenças articulares mediadas pelo sistema imunológico. Devido a essa relação, o objetivo foi avaliar a influência da infecção natural por L. infantum nas características do líquido sinovial e na expressão de TLR-2, FOXP3 e COX-2 na membrana sinovial. Cães naturalmente infectados por L. infantum (NID, N=20) foram obtidos na Unidade de Vigilância de Zoonoses (UVZ). Critérios clínicos ortopédicos foram avaliados, assim como foram obtidas amostras de líquido sinovial por artrocentese. O volume, aspecto, viscosidade, contagem total de células nucleadas (TNC) e contagem de neutrófilos e proteína total (PT) no líquido sinovial (LS) foram determinados. Os cães foram anestesiados e posteriormente eutanasiados para obtenção da membrana sinovial. Os animais do estudo apresentaram claudicação (55%), edema (25%), crepitação na articulação do joelho (30%) e luxação patelar medial (20%) e foram positivos no teste da gaveta (25%). Trinta por cento (30%) dos cães apresentaram erosão bilateral do osso subcondral, menisco e tróclea. Amastigotas de L. infantum foram visualizadas extracelularmente e dentro de macrófagos (60% dos animais). Os cães foram ainda divididos em três grupos de acordo com a concentração de proteína no líquido sinovial: GI: 2 a 2,5g/dL (valor de referência normal), GII: 2,5 a 6,0g/dL, GIII: >6g/dL. Infiltrado celular inflamatório, bem como aumento da camada da membrana sinovial, foram identificados em 70% (14/20) dos cães. O infiltrado inflamatório estava ausente em membranas sinoviais originadas de GI, presente em GII com intensidade moderada e presente em GIII com intensidade alta. O infiltrado inflamatório era predominantemente composto por macrófagos, linfócitos e neutrófilos. Houve um aumento na expressão dos marcadores TLR2 e COX2 em GIII em comparação com os grupos GII e GI. Contudo, em relação à expressão de FOXP3, houve uma marcação moderada em GI e apenas uma marcação leve em GII e GIII. Este trabalho reforça o papel da infecção por L. infantum no desenvolvimento de lesões articulares em cães. Além disso, nosso estudo indica que a LC modifica a expressão de TLR2, FOXP3 e COX2 na membrana sinovial, o que implica a manutenção e progressão do processo inflamatório.

• Leishmaniose canina líquido sinovial membrana sinovial TLR2 FOXP3 caninos

Abstract in English:

Canine mammary neoplasms with malignant mesenchymal components, such as carcinosarcomas and sarcomas, belong to an uncommon and histologically heterogeneous group. Little is known about the biological behavior of these histogenic variants. This study aimed to compare the clinicopathological characteristics and the COX-2 immunohistochemical expression of different histologic subtypes of carcinosarcomas and sarcomas. Samples of 23 carcinosarcomas and 15 sarcomas from the mammary glands of female dogs were studied. Medical records were reviewed to obtain clinical data. Subsequently, histology microscope slides were analyzed to assess for mesenchymal subtypes, necrosis, vascular invasion, histologic grades, and lymph node metastasis. Immunohistochemistry was used to assess the COX-2 expression. The malignant mesenchymal proliferation was categorized into osteosarcomas (23/40), fibrosarcomas (5/40), liposarcomas (6/40) and chondrosarcomas (4/40). The osteosarcomatous differentiation was the most predominant type among the sarcomas and carcinosarcomas and was associated with vascular invasion (P=0.010) and lymph node metastases (P=0.014). High COX-2 expression was detected in 14.3% of the carcinosarcomas (carcinoma and/or sarcoma cells) and 27.3% of the sarcomas. The carcinosarcomas and sarcomas had similar clinical and pathological characteristics and developed as large tumors, with intratumoral necrosis and a predominance of high histologic grades, although the frequency of vascular invasion and lymph node metastasis was low. Osteosarcoma subtypes presented more aggressive characteristics than non-osteosarcoma subtypes.

• Canine carcinosarcoma COX-2 mammary mesenchymal sarcoma tumor

Abstract in Portuguese:

Neoplasias mamárias caninas com componentes mesenquimais malignos, como carcinossarcomas e sarcomas, são um grupo de neoplasias pouco frequentes e histologicamente heterogêneas e pouco se sabe sobre o comportamento biológico das variantes histogênicas. O objetivo desse estudo é comparar as características anatomopatológicas e a expressão imunoistoquímica de COX-2 de diferentes subtipos histológicos de carcinossarcomas e sarcomas. Foram estudados 23 carcinosarcomas e 17 sarcomas da glândula mamária de cadelas. Os prontuários médicos foram revisados para obtenção de dados clínicos. Posteriormente, as lâminas histológicas foram avaliadas para acessar os subtipos mesenquimais, necrose, invasão vascular, grau histológico, metástase linfonodal. A imunoistoquímica foi realizada para avaliar a expressão de COX-2. Os tipos encontrados de proliferação mesenquimal maligna foram osteossarcoma (23/40), fibrossarcoma (7/40), lipossarcoma (6/40) e condrossarcoma (4/40). A diferenciação osteossarcomatosa foi predominante entre os sarcomas e carcinossarcomas e foi associado com invasão vascular (P=0,006) e metástase linfonodal (P=0,014). Uma expressão alta de COX-2 foi detectada em 14,3% dos carcinossarcomas (células carcinomatosas e/ou sarcomatosas) e 27,3% dos sarcomas. Os carcinossarcomas e sarcomas apresentaram características clínicas e patológicas semelhantes e se desenvolveram como tumores grandes, com necrose intratumoral e predomínio de alto grau histológico, mas com baixa frequência de invasão vascular e metástase distante. Os subtipos osteossarcomatosos apresentaram características mais agressivas quando comparados com subtipos não osteossarcomatosos.

• Canino carcinossarcoma COX-2 mama mesenquimal sarcoma tumor

Abstract in English:

Determining cell proliferation rates and tumor apoptosis through immunohistochemistry allows the evaluation of the biological behavior of the tumor, optimizing the patient’s clinical course. This study aimed to analyze the immunohistochemical expression of Ki-67, COX-2 and caspase-3 and correlate them with the type of response to ECT in feline cutaneous squamous cell carcinoma (SCC), thus determining the predictive potential of these variables. For this, 13 samples of feline cutaneous SCC were evaluated before ECT, and statistical analyses of the correlation intensity between the variables were performed using the Spearman correlation coefficient, with a significance level of 95%. The results indicate a significant negative correlation between histopathological grade and response to ECT (ρ=-0.6; p=0.03); there was no significant correlation between Ki-67, COX-2 and caspase-3 immunoexpression with the response to ECT (ρ=-0.18; p=0.54/ρ=-0.23; p=0.44/ρ=-0.12; p=0.69, respectively). Therefore, the study shows that the histopathological grade, tumor size and staging, degree of cellular pleomorphism and degree of inflammatory infiltrate can be considered negative prognostic factors for cutaneous SCC and negative predictors for response to ECT. However, the markers Ki-67, COX-2 and caspase-3 are not considered predictive factors for the type of response to ECT. In addition, no relationship between these immunoexpressions and greater tumor aggressiveness was observed. The SCCs evaluated in this study showed significant COX-2 labeling, indicating a potential therapeutic target. ECT has been shown to be safe and effective for local control of feline cutaneous SCC but with reduced effectiveness in larger and invasive lesions.

• caspase-3 COX-2 Ki-67 squamous cell carcinoma electrochemotherapy cats

Abstract in Portuguese:

A determinação das taxas de proliferação celular e apoptose tumoral por meio da imuno-histoquímica, permite avaliar o comportamento biológico tumoral, com otimização da evolução clínica do paciente. Este trabalho teve como objetivo analisar as expressões imuno-histoquímicas de Ki-67, COX-2 e caspase-3 e correlacioná-las com o tipo de resposta à EQT em carcinoma de células escamosas (CEC) cutâneo de felinos; assim, determinar o potencial preditivo destas variáveis. Para tanto, foram avaliadas 13 amostras de CEC cutâneo de felinos antes da EQT e as análises estatísticas quanto à intensidade de correlação entre as variáveis foram realizadas utilizando o coeficiente de correlação de Spearman, com nível de significância de 95%. Os resultados indicam que houve correlação negativa significativa entre o grau histopatológico e a resposta à EQT (ρ=-0,6; p=0,03); não houve correlação significativa entre as imunoexpressões de Ki-67, COX-2 e caspase-3 com a resposta à EQT (ρ=-0,18; p=0,54/ρ=-0,23; p=0,44/ρ=-0,12; p=0,69, respectivamente). Portanto, este estudo evidenciou que as variáveis grau histopatológico, tamanho e estadiamento tumorais, grau de pleomorfismo celular e grau do infiltrado inflamatório foram consideradas fatores prognósticos negativos para o CEC cutâneo e preditivos negativos para a resposta à EQT. Entretanto, os marcadores Ki-67, COX-2 e caspase-3 não foram considerados fatores preditivos para o tipo de resposta à EQT, assim como não foi observada relação entre essas imunoexpressões com maior agressividade tumoral. Os CECs avaliados neste estudo apresentaram importante marcação para COX-2, indicando um potencial alvo terapêutico. A EQT mostrou-se segura e efetiva para o controle local dos CECs cutâneos dos felinos, porém com efetividade reduzida em lesões maiores e invasivas.

• caspase-3 COX-2 Ki-67 carcinoma de células escamosas eletroquimioterapia gatos

Abstract in English:

ABSTRACT.- Portela V.M., Farias A.M., Moraes J.C.F., Gonçalves P.B.D., Veiga A P.M. & Oliveira J.F. 2010. Effect of medroxy-progesterone acetate on follicular growth and endometrial cycloxygenase-2 (COX-2) expression during the bovine estrous cycle. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(7):581-585. Laboratório de Biotecnologia e Reproducão Animal, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima s/n, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: valerio.portela@gmail.com The objective of this study was to evaluate the effect of medroxy-progesterone acetate (MAP) with or without estradiol benzoate (EB) on follicular growth during the estrous cycle in cattle. In the first experiment, Hereford cows were synchronized with a synthetic analogue of PGF2 alpha and were treated with two different doses of MAP (250 or 500 mg) with or without EB for 7 days starting on day 8 of the estrous cycle. Follicular growth was inhibited (P<0.05) in all cows except controls and those receiving 250mg MAP without EB. Seventy-five percent of the animals (15/20) showed estrus on days 21 and 22 of the cycle rather than at MAP withdrawal, demonstrating that these treatments did not induce estrus. To determine whether the EB treatment altered endometrial sensitivity to oxytocin and thus the luteolytic cascade, multiparous pre-synchronized cows received 5 mg of EB followed 6 hours later with 50 IU of oxytocin (OT; n=9). Eight hours after EB injection, endometrial fragments were collected from the cows on days 4, 13 and 17 of the estrous cycle and COX-2 gene expression was measured by PCR. EB increased COX-2 mRNA levels only on day 17 of the estrous cycle (P<0.05). In conclusion, MAP alone or associated with EB is able to suppress bovine follicular growth. However, EB in the presence of MAP is not efficient to induce luteolysis in cows when injected on day 8 of the estrous cycle.

• Follicular growth estradiol benzoate medroxy-progesterone acetat crescimento folicular benzoato de estradiol acetato de medroxi-progesterona

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Portela V.M., Farias A.M., Moraes J.C.F., Gonçalves P.B.D., Veiga A P.M. & Oliveira J.F. 2010. Effect of medroxy-progesterone acetate on follicular growth and endometrial cycloxygenase-2 (COX-2) expression during the bovine estrous cycle. [Efeito do acetato de medroxi-progesterona sobre o crescimento filicular e expressão endometrial de ciclooxigenase-2 (COX-2) durante o ciclo estral de bovinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(7):581-585. Laboratório de Biotecnologia e Reproducão Animal, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima s/n, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: valerio.portela@gmail.com Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do acetato de medroxi-progesterona (MAP) com ou sem benzoato de estradiol (BE) sobre o crescimento folicular durante o ciclo estral bovino. No primeiro experimento, vacas da raça Hereford foram sincronizadas com um análogo sintético de PGF2á e tratadas com duas doses diferentes de MAP (250 ou 500mg), com ou sem EB, durante 7 dias, iniciando-se no oitavo dia do ciclo estral. Observou-se uma inibição do crescimento folicular (P<0,05) em todas as vacas, exceto no grupo controle e no grupo que recebeu 250mg de MAP sem BE. Os 75% dos animais não exibiu estro no momento da remoção do MAP, mas sim nos dias 21 e 22 do ciclo, demonstrando que os tratamentos não induziram cio. Para se determinar se o tratamento com BE alterou a sensibilidade endometrial à ocitocina e, assim, a cascata luteolítica, vacas multíparas pré-sincronizadas receberam 5mg de BE, seguidos, após 6 horas, de 50 UI de ocitocina (OT; n=9). Oito horas após a administração de BE, colheram-se fragmentos endometriais das vacas, nos dias 4, 13 e 17 do ciclo estral, mensurando-se a expressão gênica de COX-2 através de PCR. O BE aumentou os níveis de RNAm de COX-2 apenas no dia 17 do ciclo estral (P<0,05). Em conclusão, o MAP isolado ou associado a BE é capaz de suprimir o crescimento folicular bovino. Entretanto, o BE, na presença de MAP é ineficaz na indução da luteólise bovina, quando injetado no oitavo dia do ciclo estral.