PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Campos L.L., Landim-Alvarenga F.C., Ikeda T.L., Monteiro B.A., Maia L., Freitas-Dell’Aqua C.P. & De Vita B. 2017. Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(3):278-286. Departamento de Reprodução Animal e Radiologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: loreta_campos@yahoo.com.br Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell types, in both human and veterinary fields, are the mesenchymal stem cells (MSC) derived from bone marrow and adipose tissue. Nowadays, there is a great interest in using stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM) and umbilical cord tissue (UCT), which can be obtained non-invasively at delivery time. Due to the scarcity of studies in bovine species, the aim of this study was to isolate, characterize, differentiate and cryopreserve MSC derived from the mesenchymal layer of amniotic membrane (AM), for the first time, and umbilical cord tissue (UCT) of dairy cow neonates after assisted delivery (AD) and from fetus at initial third of pregnancy (IT) obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0.1% collagenase solution. Six samples of AM and UCT at delivery time and six samples of AM and UCT at first trimester of pregnancy were subjected to morphology evaluation, imunophenotype characterization, in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and viability analysis after cryopreservation. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, did not or low expressed CD 34 (AM: IT-0.3%a, AD-3.4%b; UCT: 0.4%, 1.4%) and MHC II (AM: IT-1.05%a, AD-9.7%b; UCT: IT-0.7%a, AD-5.7%b). They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80% viability after cryopreservation. According to the results, bovine AM and UCT-derived cells, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, are a painless and non-invasive source of MSC and can be used for stem cell banking.

• Cryopreservation stem cells amniotic mesenchymal layer umbilical cord fetuses cell banking criopreservação células tronco cordão umbilical

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Campos L.L., Landim-Alvarenga F.C., Ikeda T.L., Monteiro B.A., Maia L., Freitas-Dell’Aqua C.P. & De Vita B. 2017. Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses. [Isolamento, cultura, caracterização e criopreservação de células tronco derivadas de camada amniótica mesenquimal e de tecido do cordão umbilical de fetuses bovinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(3):278-286. Departamento de Reprodução Animal e Radiologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: loreta_campos@yahoo.com.br As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação. Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. As células tronco mais utilizadas, tanto na medicina humana como na medicina veterinária são as células tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo. Atualmente, uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (TCU) e sangue do cordão umbilical (SCU) pode ser observada, já que estas fontes podem ser colhidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA e TCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e de fetos do terço inicial da gestação em abatedouro-frigorífico. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e TCU no momento do parto (n=6) e de MA e TCU no terço inicial de gestação (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológicas, imunofenotípica por imunocitoquímica e citometria de fluxo, diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e ainda, avaliação da viabilidade após a criopreservação por citometria de fluxo. Todas as amostras dos diferentes grupos demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para ou baixíssima expressão de CD34 (MA: TI-0,3%a, PA-3.4%b; TCU: TI-0,4%, PA-1.4%) e nula ou baixa expressão de MHC II (MA: TI-1.5%a, PA-9.7%b; UCT: TI-0.7%a, PA-5.7%b. Apresentaram também capacidade de diferenciação in vitro nas três linhagens mesodermais e quando analisadas pós criopreservação por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram viabilidade de 80%. Estes resultados indicam que MA e TCU, obtidos tanto no momento de parto como em abatedouro, de fetos bovinos podem ser utilizados como fonte não invasiva e indolor de CTMs e possibilitam a formação de bancos de armazenamento de células.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Abimussi C.J.X., Floriano B.P., Wagatsuma J.T., Canceli C.H.B., Ferreira J.Z., Garcia-Pereira F.L., Santos P.S.P. & Oliva V.N.L.S. 2017. [Efficacy and hemodynamic effects of spinal anesthesia with isobaric, hypobaric or hyperbaric ropivacaine in dogs anesthetized with isoflurane.] Eficácia e efeitos hemodinâmicos da anestesia raquidiana com ropivacaína isobárica, hipobárica ou hiperbárica em cães anestesiados com isofluorano. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(2):137-144. Departamento de Clínica, Cirurgia e Reprodução Animal, Rua Clóvis Pestana 793, Dona Amélia, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. E-mail: cjxabimussi@hotmail.com The aim of the study was to assess hemodynamic changes and complications of spinal anesthesia with ropivacaine at different baricities. Six beagle dogs aged four years. The dogs were anesthetized with isoflurane and subjected to the following treatments: Ghypo = spinal anesthesia with hypobaric ropivacaine (0.5mL of 0.9% NaCl+0.5mL ropivacaine at 0.75%); Giso = isobaric spinal anesthesia (0.5mL of 0,906% NaCl+0.5mL ropivacaine at 0.75%); Ghyper = hyperbaric spinal anesthesia (0.5mL of 10% glucose+0.5mL ropivacaine at 0.75%). After induction to anesthesia and maintenance with isoflurane, animals were positioned in right lateral recumbency for pulmonary artery catheterization through the left jugular vein. Spinal anesthesia was carried out with injection of 1mL of local anesthetic using a 22G Quincke tip needle in the L5-L6 space along 1 minute. Dogs were maintained under inhalation anesthesia for 60 minutes in ventral recumbency. HR, FR, MAP, CO, mPAP and body temperature progressively increased in all groups, whereas PCWP increased only in GHYPO at all time points. The TPRI showed significantly higher values in GISO at M1, M5 and M10 compared to the other groups, except for M5, during which GISO differed only from GHYPER. The PVRI increased at M5 compared to MB in GISO. Side effects such as unilateral motor deficit, bladder atony, excitation, acute pain and chemosis were observed. The hemodynamic changes were not relevant, although inhalation anesthesia with isoflurane might have influenced the results. The changes observed in the study demonstrate that motor blockade is likely to be obtained with isobaric and hyperbaric ropivacaine, thereby confirming the influence of baricity on the type of nerve fibers on the spinal cord. The isobaric solution results in a mixed blockade (motor and sensory blockade). Hemodynamic changes such as hypotension and bradycardia were not evidenced in this study, although local anesthetics were administered in low volumes and together with isoflurane anesthesia. Regarding complications, post-anesthetic observation is warranted in order to identify and treat possible changes. Spinal anesthesia in the conditions studied did not cause hemodynamic changes in isoflurane-anesthetized dogs and is thus considered safe for routine practice, although a few complications are prone to occur.

• naesthesia spinal cord subarachnoid cardiovascular anestesia regional subaracnoide cardiovascular

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Abimussi C.J.X., Floriano B.P., Wagatsuma J.T., Canceli C.H.B., Ferreira J.Z., Garcia-Pereira F.L., Santos P.S.P. & Oliva V.N.L.S. 2017. [Efficacy and hemodynamic effects of spinal anesthesia with isobaric, hypobaric or hyperbaric ropivacaine in dogs anesthetized with isoflurane.] Eficácia e efeitos hemodinâmicos da anestesia raquidiana com ropivacaína isobárica, hipobárica ou hiperbárica em cães anestesiados com isofluorano. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(2):137-144. Departamento de Clínica, Cirurgia e Reprodução Animal, Rua Clóvis Pestana 793, Dona Amélia, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. E-mail: cjxabimussi@hotmail.com O presente estudo objetivou avaliar a anestesia raquidiana com ropivacaína em cães alterando a baricidade do anestésico local, investigando as alterações hemodinâmicas e complicações. Foram utilizados seis cães, Beagle, 4 anos, submetidos a anestesia inalatória com isofluorano e aos tratamentos: Ghipo = anestesia raquidiana hipobárica (0,5 mL NaCl 0,9% + 0,5 mL ropivacaína 0,75%); Giso = anestesia raquidiana isobárica (0,5 mL NaCl 1,53% + 0,5 mL ropivacaína 0,75%); Ghiper = anestesia raquidiana hiperbárica (0,5 mL glicose 10% + 0,5 mL ropivacaína 0,75%). Após indução anestésica e manutenção com isofluorano, os animais foram posicionados em decúbito lateral direito para a passagem de um cateter de artéria pulmonar pela veia jugular esquerda. Após esse procedimento, a punção subaracnóide foi realizada entre L5-L6 com uma agulha espinhal 22G, seguida da administração de 1 mL de anestésico local em 1 min. Os animais foram mantidos por 60 minutos anestesiados em decúbito ventral. A FC, f, PAM, DC, PAPm e TºC apresentaram aumento progressivo em todos os grupos enquanto que a PCPm, apenas no GHIPO, aumentou ao longo de todos os momentos. O IRPT no GISO apresentou valores significativamente superiores no M1, M5 e M10 comparado aos demais grupos, exceto no M5, em que o GISO diferiu somente do GHIPER. O IRVP no GISO aumentou no M5 em comparação ao MB. Foram observados efeitos adversos como déficit motor unilateral, atonia vesical, excitação, dor aguda e quemose. De acordo com os dados obtidos no presente estudo pode-se concluir que os animais que receberam anestesia raquidiana com as soluções hiperbárica e isobárica apresentaram maior bloqueio motor comprovando que a baricidade influencia diretamente o tipo de fibra a ser bloqueada. A utilização de solução isobárica resulta em um bloqueio misto (motor e sensitivo). As alterações hemodinâmicas descritas na literatura como, bradicardia e hipotensão, não puderam ser evidenciadas neste estudo embora o volume de anestésico tenha sido baixo associado a influência dos efeitos do isofluorano. Em relação às complicações evidenciadas, sugere-se acompanhamento pós-anestésico dos animais submetidos à anestesia raquidiana a fim de que quaisquer alterações possam ser identificadas precocemente e tratadas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Alvarenga P.B., Rezende A.L., Justo F.B., Rezende S.R., Cesar J.C.G., Santos, R.M., Mundim A.V. & Saut J.P.E. 2017. [Metabolic profile of clinically healthy Jersey cows.] Perfil metabólico de vacas Jersey clinicamente saudáveis. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(2):195-203. Laboratório de Saúde em Grandes Animais, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Av. Pará 1720, Bloco 2T, Campus Umuarama, Bairro Umuarama, Uberlândia, MG 38400-902, Brazil. E-mail: jpsaut@ufu.br The understanding of animal metabolism is important for the success of livestock activity. The aim of this study was to determine the serum biochemical profile of clinically healthy Jersey cows in pre and postpartum, housed in semi-intensive production system in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. Clinical examination and blood collection from 40 multiparous lactating dairy cows, between -150 days prepartum up to 60 days postpartum (DPP) were performed. At the laboratory, serum parameters of total proteins, albumin, globulins, urea, creatinine, non-esterified fatty acids (NEFA), β-hydroxybutyrate (BHBA), triglycerides, cholesterol, high density lipoprotein (HDL), very low density lipoproteins (VLDL), low density lipoproteins (LDL), aspartate aminotransferase (AST), gamma-glutamyl transferase (GGT), creatine kinase (CK), calcium, phosphorus and magnesium were analyzed. To the total of cows (n=40) enrolled, only 21 cows were complied with the inclusion criterias. It was proceeded the Tukey test for parametric data, and to the nonparametric data it was held the Kruskal Wallis test for the comparison between days evaluated. There was no interference of negative energy balance and subclinical hypocalcemia in the occurrence of uterine diseases and reproductive performance. In conclusion, Jersey cows have biochemical profile characterized by hyperglobulinemia during peripartum, and high levels of triglycerides, but without impaired liver function and reproductive performance.

• Dairy cows metabolic profile postpartum perfil metabólico pós-parto vacas leiteiras

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Alvarenga P.B., Rezende A.L., Justo F.B., Rezende S.R., Cesar J.C.G., Santos, R.M., Mundim A.V. & Saut J.P.E. 2017. [Metabolic profile of clinically healthy Jersey cows.] Perfil metabólico de vacas Jersey clinicamente saudáveis. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(2):195-203. Laboratório de Saúde em Grandes Animais, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Av. Pará 1720, Bloco 2T, Campus Umuarama, Bairro Umuarama, Uberlândia, MG 38400-902, Brazil. E-mail: jpsaut@ufu.br O conhecimento do metabolismo dos animais é de suma importância para se obter sucesso em qualquer atividade que envolva rebanhos. Objetivou-se determinar o perfil bioquímico sérico de vacas Jersey clinicamente saudáveis no pré e pós-parto, mantidas em sistema de criação semi-intensivo na região de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. Realizou-se o exame clínico e coleta de sangue de 40 vacas da raça Jersey multíparas e lactantes em 15 momentos, entre -150 dias pré-parto até 60 dias pós-parto (DPP). No laboratório, foram analisadas as concentrações séricas de proteínas totais, albumina, globulinas, ureia, creatinina, ácidos graxos não esterificados (NEFA), β-hidroxibutirato (BHBA), triglicerídeos, colesterol, lipoproteínas de alta densidade (HDL), lipoproteínas de muita baixa densidade (VLDL), lipoproteínas de baixa densi­dade (LDL), aspartato aminotransferase (AST), gama-glutamil transferase (GGT), creatina quinase (CK), cálcio, fósforo e magnésio. Dos 40 animais, apenas 21 vacas atenderam aos critérios de inclusão e seus dados foram utilizados. Procedeu-se o teste de Tukey para os dados paramétricos e para os dados não paramétricos realizou-se o teste de Kruskal Wallis na comparação entre os momentos avaliados. Não houve interferência do balanço energético negativo e da hipocalcemia subclínica na ocorrência de doenças uterinas e no desempenho reprodutivo. Concluiu-se que vacas da raça Jersey apresentam perfil bioquímico caracterizado por hiperglobulinemia durante o periparto, além de níveis elevados de triglicérides, entretanto, sem comprometimento da função hepática e desempenho reprodutivo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cedeno D.A.Q., Lourenço M.L.G., Daza C.A.B., Pagnani Filho P. & Chiacchio S.B. 2016. Electrocardiogram assessment using the Einthoven and base-apex lead systems in healthy Holstein cows and neonates. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):1-7 Departamento Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior, Cx. Postal 560, Botucatu, SP. 18618-970, Brazil. E-mail: mege@fmvz.unesp.br The objective aimed to describe the electrocardiographic behavior of parameters in Holstein pregnant cows and neonates during the perinatal period. The electrocardiograms were performed using a computerized electrocardiogram. The animals selected for the study were 23 cows and 18 neonates. Maternal electrocardiographic examinations were conducted in the 35, 28, 21, 14, 7 days and one-day pre –partum and the neonates were evaluated in six moments; at the time of birth, 7, 14, 21, 28 and 35 days after delivery. The evaluations were done in pre and post-delivery cows and into the group of neonates between female and male. For each electrocardiographic recording P-wave duration and amplitude, PR interval and the QRS complex duration, R, S-wave amplitude and polarity, QT and RR interval duration were examined. Changes in heart rate, ST segment and T wave polarity were recorded in leads of Einthoven and base-apex planes. The mean electrical axis of the QRS complex was calculated. In cows the results when comparing the two leads system, there are significant changes in the amplitude of the waves P, R, S, and T and the duration of the intervals PR, ST and QRS complex. The difference between primiparous and multiparous dairy cows was in the amplitude of the Twave. It was concluded that the base-apex system is a suitable lead for monitoring heart rhythm in Holstein cows and Einthoven in neonates. During the first month of life, no differences in P, Q, S and T waves, in PR, QRS, and ST intervals and in axis orientation was observed in neonates. There was a significant difference in duration of the QT interval. Among sexes, the difference was in the Q amplitude. This study incorporated the calves and Holstein cows in a single study in search of baseline information regarding the duration and morphology of the ECG parameters. In conclusion, it was proved that, with increasing age, there are changes in ECG components associated with variations in the distance between the recording electrode and the heart. The study contributes by providing Holstein reference values for clinical evaluations.

• Electrocardiogram heart cattle eletrocardiograma bovinos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cedeno D.A.Q., Lourenço M.L.G., Daza C.A.B., Pagnani Filho P. & Chiacchio S.B. 2016. Electrocardiogram assessment using the Einthoven and base-apex lead systems in healthy Holstein cows and neonates. [Avaliação do eletrocardiograma utilizando os sistemas Einthoven e base-ápice em vacas e neonatos saudáveis da raça Holandesa.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):1-7 Departamento Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior, Cx. Postal 560, Botucatu, SP. 18618-970, Brazil. E-mail: mege@fmvz.unesp.br Tem como objetivo descrever o comportamento eletrocardiográfico de parâmetros em vacas da raça Holandesa grávidas e recém-nascidos durante o período perinatal. Os eletrocardiogramas foram realizados utilizando um eletrocardiógrafo computadorizado. Os animais selecionados para o estudo foram 23 vacas e 18 neonatos. Exames eletrocardiográficos maternos foram realizadas em 35, 28, 21, 14, 7 dias e um dia de pré-parto e nos neonatos foram avaliados em seis momentos; no momento do nascimento, 7, 14, 21, 28 e 35 dias após o parto. As avaliações foram realizadas em vacas pré e pós-parto e no grupo de neonatos entre fêmeas e machos. Para cada duração da gravação eletrocardiográfica analisou-se onda P e amplitude, intervalo PR e da duração do complexo QRS, R, S amplitude de onda e polaridade, QT e duração do intervalo RR. Mudanças na frequência cardíaca, segmento ST e polaridade da onda T foram registradas. A média do eixo eléctrico do complexo QRS foi calculada. Em vacas, há mudanças significativas na amplitude das ondas P, R, S, T, e a duração dos complexos QRS e intervalos PR e ST. A diferença entre as vacas leiteiras multíparas e primíparas estava na amplitude da onda T. Concluiu-se que o sistema base-ápice é adequado para monitorar o ritmo cardíaco em vacas da raça Holandesa e o Einthoven em neonatos. Nos neonatos durante o primeiro mês de vida, não houve diferenças nas ondas P, Q, S e T, em intervalos PR, QRS, e ST e na orientação do eixo. Houve diferença significativa na duração do intervalo QT. Entre os sexos, a diferença estava na amplitude Q. O presente estudo incorporou os bezerros e vacas da raça Holandesa em um único estudo, em busca de informações em relação a duração e morfologia dos parâmetros do ECG. Conclui-se portanto que, com o aumento da idade, ocorrem alterações nos componentes do ECG, associadas com as variações na distância entre o elétrodo de registo e o coração. O estudo contribui, fornecendo valores de referência de bovinos da raça Holandesa para avaliações clínicas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva M.I.V., Chitarra C.S., Oliveira Filho J.X., Morés N., Ito A.T.H., Rocha I.S.M., Nakazato L. & Dutra V. 2016. [Identification of differentially expressed transcripts by Pasteurella multocida iron-starved condition.] Identificação de transcritos diferencialmente expressos por Pasteurella multocida em condições de privação de ferro. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(10):965-970. Laboratório de Microbiologia e Biologia Molecular Veterinária, Universidade Federal do Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa 2367, Bairro Boa Esperança, Cuiabá, MT 78060-900, Brazil. E-mail: valdutra@ufmt.br Iron (Fe) is an essential element and the ability to acquire it in vivo has been described in several pathogens as virulence factors. Global analyses of transcripts during iron deprivation have been described by microarray studies, however recently RNA-seq analysis showed superior results. The high pathogenic swine strain of Pasteurella multocida (BRMSA 1113) was grown in two conditions with different concentrations of Fe (control and deprivation) in order to analyze the differentially expressed transcripts. The total RNA of the two conditions was extracted and sequenced by new generation Ion Torrent plataform. Data were analyzed in Ion Reporter™ Software and processed in Rockhopper software. Sequence analysis shows 1,341,615 readings with median length of 81pb, with 96% of alignment to the reference genome Pasteurella multocida strain 3489, and 98.8% accuracy. Reads mapping to genome of P. multocida in these two conditions detected 2,652 transcripts, which 177 (6.7%) were differentially expressed, with 93 in the control condition (Fe+) and 84 provided with iron deprivation condition (Fe-). In condition (Fe-), differential expressed transcript profile were associated to function of cellular transport (fbpABC, high-affinity Fe2+/Pb2+ permease and periplasmic protein probably involved in hight-affinity Fe2+), transcptional regulators and hypothetical proteins. The control condition (Fe+) shows differential expressed transcripts profile associated to RNA anti-sense (asRNA) energetic metabolism genes (fructose-1,6-bisphosphatase). The study showed that the Fe restriction increases the expression of genes involved in cellular transport, transcriptional regulators, hypothetical and unknown proteins, and also allowed the identification of High-affinity Fe2+/Pb2+ permease e Periplasmic protein probably involved in high-affinity Fe2+, that constitute a possible alternative route for Fe absorption.

• Pasteurella multocida pasteurellosis Fe deprivation RNA-seq pasteurelose xpressão gênica Fe

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva M.I.V., Chitarra C.S., Oliveira Filho J.X., Morés N., Ito A.T.H., Rocha I.S.M., Nakazato L. & Dutra V. 2016. [Identification of differentially expressed transcripts by Pasteurella multocida iron-starved condition.] Identificação de transcritos diferencialmente expressos por Pasteurella multocida em condições de privação de ferro. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(10):965-970. Laboratório de Microbiologia e Biologia Molecular Veterinária, Universidade Federal do Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa 2367, Bairro Boa Esperança, Cuiabá, MT 78060-900, Brazil. E-mail: valdutra@ufmt.br Ferro (Fe) é um elemento essencial e a capacidade de adquiri-lo in vivo têm sido descrita em diversos agentes patogênicos através de fatores de virulência. Análises de transcritos durante a privação de Fe tem sido descritos através da técnica de “microarray”, entretanto a técnica de RNA-seq recentemente tem demonstrado resultados superiores. Neste trabalho, o isolado de Pasteurella multocida (Pm 16759) altamente patogênico em suínos foi cultivado em duas condições com diferentes concentrações de Fe (controle e privação) com o objetivo de analisar transcritos diferencialmente expressos. O RNA total das duas condições foi extraído e sequenciado através da plataforma de nova geração Ion Torrent. Os dados foram analisados no Software Ion Reporter™ e processados no programa Rockhopper. Foram obtidas 1.341.615 leituras com tamanho médio de 81pb, com 96% de alinhamento com o genoma de Pasteurella multocida subsp. multocida 3480 e 98,8% de acurácia. No mapeamento das leituras das duas condições, observou-se 2,652 transcritos e destes, 177 (6,7%) foram diferencialmente expressos, sendo 93 na condição controle (Fe+) e 84 na condição de privação (Fe-). Na condição de privação de Fe, o perfil de transcritos foram associados a função de transporte celular (fbp ABC, permease de alta afinidade com Fe2+/Pb2+ e proteína periplasmática de alta afinidade com Fe2+), reguladores transcricionais e proteínas hipotéticas. O perfil na condição controle (Fe+) apresentou transcritos diferencialmente expressos associados ao RNAs anti-sense (asRNA) e genes do metabolismo energético (fructose-1,6-bisfosfatase). O estudo comprovou que a restrição de Fe aumenta a expressão de genes envolvidos no transporte celular, reguladores transcricionais, proteínas hipotéticas e desconhecidas e permitiu ainda a identificação de novos genes como a permease de alta afinidade com Fe2+/Pb2+ e proteina periplasmática de alta afinidade com Fe2+, que configuram uma possível via alternativa de absorção de Fe.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Sousa P.C., Santos E.A.A., Silva A.M., Bezerra J.A.B., Souza A.L.P., Lima G.L., Oliveira M.F. & Silva A.R. 2016. Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):767-774. Laboratory of Animal Germoplasm Conservation, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, BR-110 Km 47, Presidente Costa e Silva, Mossoró, RN 599625-900, Brazil. E-mail: legio2000@yahoo.com The aim of the study was to cryopreserve the semen of six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) in Tris-yolk and glycerol diluent, and to determine the damage caused by the freezing-thawing process, using fluorescent markers and ultrastructural analysis. Semen samples (n=11) collected from 4 adult six-banded armadillos by electroejaculation were cryopreserved in Tris diluent plus 20% egg yolk and 3% glycerol, in a fast freezing curve. Classical analysis of samples was performed after dilution, refrigeration and thawing, followed by fluorescence analysis, using a combination of fluorescent probes to assess membrane integrity (propidium iodide - PI and Hoechst - H342), and mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker Red®). We also used the ultrastructural analysis to verify possible morphological alterations caused by cryoinjuries. When compared with fresh samples, we verified a significant decline in all the armadillos’ semen parameters after thawing, in which only 6.1% motile sperm were found. However, the percentage of sperm which remained with viable (13%) and functional (24.7%) membranes after thawing suggests that some cells could be live but immotile. Analysis using fluorescent markers revealed that the mitochondria of armadillos’ sperm is highly sensible to the freezing protocol and the findings through ultrastructure analysis proved this statement. Additionally, the images obtained by transmission electron microscopy revealed that frozen-thawed sperm presented damaged plasma membrane, nuclear modifications as changes in chromatin and acrossomal changes relative to sperm capacitation. In conclusion, this study is the first attempt to cryopreserve the semen of an armadillo species, and to help us to identify critical points on the freezing-thawing procedure in order to improve the protocol.

• Sperm armadillo Euphractus sexcinctus cryopreservation semen mitochondrial tatu-peba criopreservação sêmen mitocondria

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Sousa P.C., Santos E.A.A., Silva A.M., Bezerra J.A.B., Souza A.L.P., Lima G.L., Oliveira M.F. & Silva A.R. 2016. Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation. [Identificação de danos ultraestruturais e funcionais em espermatozoides de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) oriundos da criopreservação.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):767-774. Laboratory of Animal Germoplasm Conservation, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, BR-110 Km 47, Presidente Costa e Silva, Mossoró, RN 599625-900, Brazil. E-mail: legio2000@yahoo.com O objetivo deste estudo foi criopreservar o sêmen de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) em diluente Tris-gema e glicerol, e determinar os danos causados pelo processo de congelação-descongelação, utilizando marcadores fluorescentes e análise ultraestrutural. As amostras de sêmen (n=11) coletadas de 4 tatus-peba adultos por eletroejaculação foram criopreservadas em diluente Tris acrescido de 20% de gema de ovo e 3% de glicerol, em curva rápida de congelação. A análise clássica das amostras foi realizada após a diluição, refrigeração e descongelação, seguida por análise de fluorescência, utilizando uma combinação de sondas fluorescentes para avaliar a integridade da membrana (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H342), e a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker RED®). Foi também utilizada a análise ultraestrutural para verificar possíveis alterações morfológicas causadas pela crioinjúria. Quando comparadas com as amostras a fresco, verificou-se uma queda significativa em todos os parâmetros seminais dos tatus após a descongelação, em que apenas 6,1% de espermatozoides móveis foram encontrados. No entanto, o percentual de espermatozoides que permaneceu com membrana viável (13%) e funcional (24,7%) após a descongelação sugere que algumas células podem estar vivas, mas imóveis. Análises utilizando marcadores fluorescentes revelaram que as mitocôndrias dos espermatozoides de tatus são altamente sensíveis ao protocolo de congelação e os achados através da análise ultraestrutural comprovaram esta afirmação. Além disso, as imagens obtidas por microscopia eletrônica de transmissão revelaram que espermatozoides congelados-descongelados apresentaram membranas plasmáticas danificadas, modificações nucleares como alterações na cromatina, e alterações acrossomais relativas à capacitação espermática. Em conclusão, este estudo é a primeira tentativa de criopreservação de sêmen em uma espécie de tatu, e nos auxiliou a identificar pontos críticos no processo de congelação-descongelação, a fim de melhorar o protocolo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Souza W.L., Moraes E.A., Costa J.M.S., Souza P.H.F., Lopes Junior E.S., Oliveira R.P. & Toniolli R. 2016. [Effect of different concentrations of melatonin to ram spermatozoa on oxidative stress after cryopreservation.] Efeito de diferentes concentrações de melatonina em espermatozoides de carneiros sobre estresse oxidativo após criopreservação. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):657-664. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Fundação Universidade Federal do Vale do São Francisco, Rodovia 407 Km 12, Lote 543, Projeto Nilo Coelho C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: wilde@zootecnista.com.br The aim was to evaluate the effect of adding different concentrations of melatonin in ram semen diluted after cryopreservation. Ten ejaculates were collected0 from three adult ram (n=30) by means of artificial vagina for sheep. The collected samples were diluted in Tris-egg yolk, to a final concentration 200x106 sptz/mL kept in water bath at 32°C, and melatonin added as treatments: control; 100pM; 100nM; 100&#956;M and 1mM melatonin. Then, the samples were cooled in a cold chamber at 5°C for two hours, in straws of 0.5mL and sealed. They were stored under the liquid nitrogen vapor for 15 minutes to 8cm of liquid blade and frozen with liquid nitrogen. Samples were analyzed for sperm motility, membrane integrity, acrosomal membrane, mitochondrial activity, oxidative stress and quantification of the binding capacity. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared by Tukey test at 5% probability. The total and progressive motility of thawed sperm were higher in samples treated with 100pM melatonin (62.99 and 45.07%, respectively; P<0.05) when compared to other treatments. The addition of different concentrations of melatonin in semen diluted with the exception of 1mM concentration, a higher percentage of cells with intact plasma membrane, as compared with the control (P<0.05). The percentage of sperm with acrosome membrane integrity was higher in the semen with 100pM melatonin (P<0.05) than the other treatments. The high mitochondrial activity was higher in spermatozoa treated with 100pM melatonin (69.30%; P<0.05). Addition of 100nM melatonin reduced the amount of TBARS after cryopreservation (2.84, P<0.05) when compared with the other treatments. After thawing, the number of sperm which bind to the perivitelline membrane was higher in the melatonin treated with 100pM (155,73; P<0.05). Therefore, melatonin addition the semen diluted can be useful to enhance the cryopreservation of sheep semen, improving fertilization rates through artificial insemination.

• Melatonin antioxidant freezing spermatozoa stress melatonina congelamento

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Souza W.L., Moraes E.A., Costa J.M.S., Souza P.H.F., Lopes Junior E.S., Oliveira R.P. & Toniolli R. 2016. [Effect of different concentrations of melatonin to ram spermatozoa on oxidative stress after cryopreservation.] Efeito de diferentes concentrações de melatonina em espermatozoides de carneiros sobre estresse oxidativo após criopreservação. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):657-664. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Fundação Universidade Federal do Vale do São Francisco, Rodovia 407 Km 12, Lote 543, Projeto Nilo Coelho C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: wilde@zootecnista.com.br Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações de melatonina no sêmen diluído de carneiros após criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Os ejaculados coletados foram diluídos em Tris-Gema de ovo, para a concentração final de 200x106 sptz/mL, mantidos em banho maria a 32°C, e a melatonina adicionada conforme os tratamentos: Controle; 100pM; 100nM; 100&#956;M e 1mM de melatonina. Então, as amostras foram resfriadas em câmara fria a 5°C por duas horas, envasadas em palhetas de 0,5 mL e lacradas. Logo após, foram acondicionadas sob vapores do nitrogênio liquido, por 15 minutos, a 8cm da lâmina líquida e congeladas com nitrogênio líquido. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática, membrana acrossomal, atividade mitocondrial, quantificação do estresse oxidativo e a capacidade de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A motilidade total e progressiva dos espermatozoides descongelados foi maior nas amostras tratadas com 100pM de melatonina (62,99 e 45,07% respectivamente; P<0,05) quando comparado aos demais tratamentos. A adição das diferentes concentrações de melatonina no sêmen diluído, com exceção da concentração de 1 mM, apresentou maior percentual de células com membrana plasmática íntegra, quando comparadas com o controle (P<0,05). O percentual de espermatozoides com integridade da membrana do acrossoma foi maior no sêmen tratado com 100 pM de melatonina (P<0,05) do que nos demais tratamentos. A alta atividade mitocondrial foi maior nos espermatozoides tratados com 100 pM de melatonina (69,30%; P<0,05). A adição de 100 nM de melatonina reduziu a quantidade de TBARS após a criopreservação (2,84; P<0,05) quando comparado aos demais tratamentos. Após o descongelamento, o número de espermatozoides que se ligaram à membrana perivitelina foi maior nos tratados com 100 pM de melatonina (155,73; P<0,05). Portanto, a adição de melatonina no sêmen diluído pode ser útil para aperfeiçoar a criopreservação do sêmen de ovinos, melhorando as taxas de fertilização por meio da inseminação artificial.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Karam R.G., Cury F.S., Ambrósio C.E. & Mançanares C.A.F. 2016. [Gliceryn can replace formaldehyde for anatomic conservation.] Uso da glicerina para a substituição do formaldeído na conservação de peças anatômicas. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):671-675. Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Orlando Marques de Paiva 87, Bloco 17, Piso Superior, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508 270, Brazil. E-mail: fcury@usp.br The formalization is the main form of body and anatomic conservation, mainly due to its low cost. The technique is based on the use of formaldehyde (5-20%) as fixative and preservative. However there are several negative factors on their use, unpleasant smell, browning, weight gain and stiffness of parts and serious environmental problems if disposed of incorrectly, and is a product classified by the International Agency for Research on Cancer as highly carcinogenic. There are several options to replace formaldehyde and glicerinação is one of them, whose which will be treated in this work. Glycerin dehydrates the cell and acts as antifungal and antibacterial, and has many advantages compared to formaldehyde. But its cost is still high and this explains their limited use in the anatomy lab. This work aims to show the advantages of using glycerin in relation to formaldehyde and propose a possible replacement of this carcinogen to preserve the health of students, staff and teachers within the laboratory, and allows a more pleasant environment for learning.

• Glycerination formalization glicerinação formalização

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Karam R.G., Cury F.S., Ambrósio C.E. & Mançanares C.A.F. 2016. [Gliceryn can replace formaldehyde for anatomic conservation.] Uso da glicerina para a substituição do formaldeído na conservação de peças anatômicas. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):671-675. Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Orlando Marques de Paiva 87, Bloco 17, Piso Superior, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508 270, Brazil. E-mail: fcury@usp.br A formalização é a principal forma de conservação de corpos e peças anatômicas, devido principalmente ao seu baixo custo. A técnica baseia-se na utilização do formaldeído (5-20%) como fixador e conservador. Entretanto existem vários fatores negativos à sua utilização, como odor desagradável, escurecimento, aumento de peso e rigidez das peças e sérios problemas ambientais quando descartada de forma incorreta, além de ser um produto classificado pela Agência Internacional de Pesquisas em Câncer como altamente cancerígeno. Existem várias opções para substituir o formaldeído, a glicerinação é uma delas, cujo será tratada neste trabalho. A glicerina atua como antifúngico e bactericida, além de ter muitas vantagens em relação ao formol, tratando-se de odor, textura e coloração, além de não ser prejudicial a saúde. Porém o seu custo ainda é elevado e isso explica sua pouca utilização em laboratórios de anatomia. Este trabalho tem como objetivo mostrar as vantagens do uso da glicerina em relação ao formol e propor uma possível substituição deste produto cancerígeno para preservar a saúde dos alunos, funcionários e professores dentro do laboratório, além de permitir um ambiente mais agradável para o aprendizado.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Martins T., Rosa A.F., Castelani L., Miranda M.S. de, Arcaro J.R.P. & Pozzi C.R. 2016. Intramammary treatment with gentamicin in lactating cows with clinical and subclinical mastitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):283-289. Centro Apta Bovinos de Leite, Instituto de Zootecnia, Rua Heitor Penteado 56, Centro, Nova Odessa, SP 13460-000, Brazil. E-mail: martins_thamires@hotmail.com The study evaluated the microbiological profile of milk samples collected before and after mastitis treatment with gentamicin and investigated biofilms production and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus spp. isolated. The presence of gentamicin residues in milk after the recommended withdrawal period was also evaluated. Antimicrobial residues were analyzed by Delvotest® SP NT over a period of 12 days beginning after 24 hours the last gentamicin application. Some of Staphylococcus spp. isolates were biofilm producers (19.05%). Staphylococcus spp. showed high levels of resistance to neomycin (16.95%), penicillin G (10.17%), and ampicillin (10.17%). Multidrug resistance to all antibiotics tested was observed in 1.69% of the Staphylococcus spp. isolates. Among 1440 mammary quarter milk samples 24.95% presented gentamicin residues after the withdrawal period. Gentamicin residues were also detected in 3.8% of samples from calibrated glass recorder jar (n=383) 4.1 days after treatment. The indiscriminate use of antibiotics may lead to the emergence of multidrug-resistant strains as well as increasing the risk of presence of residues of these drugs in milk. These problems affect the milk quality and may become a public health problem.

• Antibiotic residues biofilm mastitis multiresistance Staphylococcus spp. resíduos de antibióticos biofilme mastite multirresistência

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Martins T., Rosa A.F., Castelani L., Miranda M.S. de, Arcaro J.R.P. & Pozzi C.R. 2016. Intramammary treatment with gentamicin in lactating cows with clinical and subclinical mastitis. [Tratamento intramamário com gentamicina em vacas com mastite clínica e subclínica durante a lactação.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):283-289. Centro Apta Bovinos de Leite, Instituto de Zootecnia, Rua Heitor Penteado 56, Centro, Nova Odessa, SP 13460-000, Brazil. E-mail: martins_thamires@hotmail.com Este estudo avaliou o perfil microbiológico de amostras de leite colhidas antes e após o tratamento da mastite com gentamicina e investigou a produção de biofilmes e o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus spp. isolados. Avaliou-se também a presença de resíduos de gentamicina no leite após o período de carência recomendado. Resíduos de antimicrobianos foram analisados por Delvotest® SP NT ao longo de um período de 12 dias, iniciando 24 horas após a última aplicação de gentamicina. Alguns dos Staphylococcus spp. isolados apresentaram produção de biofilmes (19,05%). Staphylococcus spp. apresentaram elevados níveis de resistência à neomicina (16,95%), penicilina G (10,17%), e ampicilina (10.17%). Multirresistência a todos os antibióticos testados foi observada em 1,69% dos Staphylococcus spp. isolados. Do total de 1440 amostras de leite de quartos mamários, 24,95% apresentaram resíduos de gentamicina após o período de carência. Resíduos de gentamicina também foram detectados em 3,8% das amostras de balões volumétricos coletores de leite (n= 383), 4,1 dias após o tratamento. O uso indiscriminado de antibióticos pode levar ao aparecimento de estirpes multirresistentes bem como o aumento do risco da presença de resíduos destas drogas no leite. Esses problemas afetam a qualidade do leite e podem tornar-se um problema de saúde pública.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Jimenez C.R., Penitente-Filho J.M., Torres C.A.A., Medeiros A.M. & Silva L.S. 2016. Vitrification of bovine preantral follicles with dimethylsulfoxide and sucrose plus &#945;-tocopherol. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):209-215. Laboratório de Nutrição Animal, Centro de Energia Nuclear a Agricultura, Universidade de São Paulo, Av. Centenário 303, Cx. Postal 96, Piracicaba, SP 13400-970, Brazil. E-mail: zoocaro@hotmail.com The objective of this study was to evaluate the vitrification of bovine preantral follicles with dimethylsulfoxide (D) and sucrose (S) plus &#945;-tocopherol 5mmol/L (T5) or 10mmol/L (T10) and, evaluate the thawed with minimal essential medium (m) with or without sucrose (s). Ovaries of cows were collected from slaughterhouse for the experiment I (n=66) and II (n=51). In the laboratory ovarian fragments were randomly assigned either to fresh control and 8 vitrification treatments (Controle and Dm; Dms, DSm; DSms; DST5m; DST5ms; DST10m; DST10ms). Ovarian fragments were placed in vitrification solution (5 min) and immersed in liquid nitrogen (-196°C), after a week, the fragments were thawed and analyzed. In the experiments I, preantral follicles were morphologically observed for histological evaluation, (normal; degenerated and developing of stage). In the experiment II, preantral follicles were mechanically isolated from ovarian tissue and examined with trypan blue, where dead and live corresponded to stained or non-stained. The treatments DSm, DSms and DST10m were effective in preserving the morphology in situ. However, the viability of isolated preantral follicles after vitrification remained high only in treatment DST10m. Thus, DST10m preserves survival rates and morphological integrity during vitrification of bovine preantral follicles.

• Vitrification follicles sucrose plus α-tocopherol dimethylsulfoxide oocyte vitrificação folículos dimetilsulfóxido criopreservação oócito

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Jimenez C.R., Penitente-Filho J.M., Torres C.A.A., Medeiros A.M. & Silva L.S. 2016. Vitrification of bovine preantral follicles with dimethylsulfoxide and sucrose plus &#945;-tocopherol. [Vitrificação de folículos pré-antrais bovinos com dimetilxulfoxido e sacarose adicionado de &#945;-tocopherol.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):209-215. Laboratório de Nutrição Animal, Centro de Energia Nuclear a Agricultura, Universidade de São Paulo, Av. Centenário 303, Cx. Postal 96, Piracicaba, SP 13400-970, Brazil. E-mail: zoocaro@hotmail.com Os objetivos deste estudo foram avaliar a vitrificação de folículos pré-antrais bovinos com dimetilsulfóxido (D) e sacarose (S) adicionando &#945;-tocoferol 5mmol/L (T5) ou 10mmol/L (T10) e, avaliar o aquecimento com meio essencial mínimo (m) com ou sem sacarose (s). Ovários de fêmeas bovinas foram coletados de abatedouro, para o experimento I (n= 66) e II (n= 51). No laboratório fragmentos ovarianos foram distribuídos aleatoriamente para o controle fresco e 8 tratamentos de vitrificação (Controle e Dm; Dms, a DSm; DSms; DST5m; DST5ms; DST10m; DST10ms). Os fragmentos ovarianos foram colocados na solução de vitrificação (5 min) e imersos em nitrogênio líquido (-196°C). Após uma semana os fragmentos foram aquecidos e analisados. No experimento I, folículos pré-antrais foram observados morfologicamente para avaliação histológica (normal, degenerados e estádio de desenvolvimento). No experimento II, folículos pré-antrais foram mecanicamente isolados do tecido ovariano e examinados com o azul de trypan, observando mortos e vivos corados e não corados respetivamente. Os tratamentos a DSm, DSms e DST10m foram eficazes na preservação da morfologia in situ. No entanto, a viabilidade de folículos pré-antrais isolados após a vitrificação manteve-se elevada apenas no tratamento DST10m. Assim, DST10m preservou as taxas de sobrevivência e integridade morfológica durante a vitrificação de folículos pré-antrais bovinos.