Resultado da pesquisa (4)
Termo utilizado na pesquisa tuberculinização
#1 - Indirect ELISA as a complementary diagnostic method of bovine tuberculosis
Abstract in English:
Bovine tuberculosis is an economic and health problem, requiring precise diagnostic methods for its control and eradication. The aim of this study was to evaluate the performance of a commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test for the diagnosis of bovine tuberculosis. A total of 1,644 cattle from eight dairy herds were evaluated using the comparative cervical tuberculin test (CCTT). Three of the herds had no recent tuberculosis infection, and the other five had shown positive results in a previous tuberculin test. For the serological diagnosis of tuberculosis, a commercial ELISA antibody test kit for Mycobacterium bovis was used. Serum samples from 846 cattle from the eight herds were evaluated using ELISA for M. bovis. Animals that were positive based on either CCTT or ELISA for M. bovis or both were sent to slaughter. Samples of their lungs, livers, and lymph nodes were collected and stored under refrigeration for microbiological culture and subsequent confirmation by polymerase chain reaction. Samples from the same tissues were also fixed with 10% formaldehyde in bottles for histopathological examination and stained with hematoxylin and eosin (HE). Of the 1,644 cattle, 61 were considered positive and 65 inconclusive based on CCTT. Retesting of the inconclusive samples identified an additional 19 positive cases, totaling 80 (4.8%) CCTT-positive animals from five herds. ELISA for M. bovis identified 4.2% (36/846) positive cattle, of which 35 were considered negative and one inconclusive based on CCTT. Of the 36 positive cases identified by ELISA for M. bovis, 27 were euthanized, 11% (3/27) showed suggestive lesions of tuberculosis on macroscopic examination, and two were confirmed by histological, microbiological, and PCR methods. The weak association of ELISA for M. bovis with the results obtained by macroscopic, histological, and microbiological isolation indicates the fragility of ELISA performance in field conditions. Therefore, it is suggested that its use as a complementary method for herd sanitation be based on the local epidemiological situation.
Abstract in Portuguese:
A tuberculose bovina é um problema econômico mundial e de saúde, que requer métodos de diagnóstico precisos para controle e erradicação. Objetivou-se com este estudo avaliar o desempenho de um teste comercial de ELISA no diagnóstico da tuberculose bovina. Foram avaliados pelo teste cervical comparativo (TCC) 1644 bovinos, provenientes de oito rebanhos de exploração leiteira, sendo três deles sem histórico recente da doença, e outros cinco com resultados positivos no último exame de tuberculinização. Para o diagnóstico sorológico da tuberculose utilizou-se um kit comercial de ELISA Mycobacterium bovis antibody test (ELISA M. bovis). Amostras de soro sanguíneo de 846 bovinos provenientes dos mesmos rebanhos foram também avaliadas no ELISA M. bovis. Os bovinos positivos no TCC e/ou ELISA M. bovis foram encaminhados para o abate sanitário. Dos positivos no ELISA para M. bovis foi realizado o exame macroscópico das carcaças e classificação das mesmas em: com presença ou ausência de lesões. Amostras de pulmão, fígado, e linfonodos, foram colhidas em duplicata para realização dos exames de cultivo microbiológico com posterior confirmação por PCR, e exame histopatológico com coloração de hematoxilina e eosina (HE). Dos 1,644 bovinos, 61 foram considerados positivos e 65 inconclusivos no TCC. O reteste dos inconclusivos identificou mais 19 positivos. No total, 80 (4,8%) bovinos positivos no TCC, provenientes de 5 rebanhos foram encaminhados para abate. O ELISA para M. bovis identificou 4,2% (36/846) de bovinos positivos, sendo 36 considerados negativos e um inconclusivo no exame de tuberculinização. Dos positivos no ELISA para M. bovis, 27 foram eutanasiados, e no exame macroscópico das carcaças 11% (3/27) dos animais apresentaram lesões sugestivas de tuberculose, e em apenas dois houve confirmação da doença pelos métodos histológico, microbiológico e PCR. A baixa associação dos resultados obtidos no ELISA para M. bovis com os exames macroscópico, histológico e isolamento microbiológico apontam para a fragilidade do desempenho do ELISA para o diagnóstico de tuberculose. Sugere-se assim que seu uso como método complementar para saneamento de rebanhos, seja adotado com cautela e considere a situação epidemiológica local.
#2 - Standardization of the immunoallergic skin test applied for the diagnosis of tuberculosis and mycobacterioses in swine (Sus scrofa) experimentally sensitized with oil suspensions of inactivated Mycobacterium bovis or M. avium, 34(2):123-128
Abstract in English:
ABSTRACT.- Oliveira F.C.S., Pinheiro S.R., Azevedo S.S., Santos C.S.A.B., Lilenbaum W., Soto F.R.M., Roxo E. & Vasconcellos S.A. 2014. [Standardization of the immunoallergic skin test applied for the diagnosis of tuberculosis and mycobacterioses in swine (Sus scrofa) experimentally sensitized with oil suspensions of inactivated Mycobacterium bovis or M. avium.] Padronização do teste imunoalérgico aplicado ao diagnóstico da tuberculose e micobacterioses em suínos (Sus scrofa) experimentalmente sensibilizados com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(2):123-128. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: savasco@usp.br
The diagnostic value of the cutaneous allergic response to tuberculin in piglets experimentally sensitized intramuscularly with the oily suspensions of heat inactivated M. bovis or M. avium was investigated. Ninety-one animals were used and divided into four groups: groups A and B were formed each with 25 individuals, and groups C and D, with 21 and 20 individuals, respectively, balancing the characteristics of race, ancestry, age and sex. At the age of 30 days, all the animals were submitted to the screening test with the use of M. bovis PPD, by the intradermal route at the base of the ear and no reaction was detected. Sixty days after the screening tuberculin test, animals of the group A were injected intramuscularly with 0.5 mL of oily suspension of M. avium D4 strain; animals of the group B received 0.5 mL of an oily suspension of M. bovis, AN5 strain; group C (control I) received 0.5 mL of an oily adjuvant; and the individuals of the group D (control II) received 0.5 mL of saline solution. Following 30 days of sensitization, comparative skin reactions were measured by the variation in skin thickness with a caliper at 0h, 24h, 48h an 72h after applications of tuberculins. In the comparative test measured at 48 or 72h, the reaction was considered negative when the difference of the reactions between bovine PPD and avian PPD was less than 6.7 mm; suspected or inconclusive, when the difference stood in the range of 6.7 to 7.5 mm; and positive according to the type of PPD, considering tuberculosis the M. bovis PPD and mycobacteriosis the M. avium PPD, when the difference of the reaction was greater than 7.5 mm.
Abstract in Portuguese:
RESUMO- Oliveira F.C.S., Pinheiro S.R., Azevedo S.S., Santos C.S.A.B., Lilenbaum W., Soto F.R.M., Roxo E. & Vasconcellos S.A. 2014. [Standardization of the immunoallergic skin test applied for the diagnosis of tuberculosis and mycobacterioses in swine (Sus scrofa) experimentally sensitized with oil suspensions of inactivated Mycobacterium bovis or M. avium.] Padronização do teste imunoalérgico aplicado ao diagnóstico da tuberculose e micobacterioses em suínos (Sus scrofa) experimentalmente sensibilizados com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(2):123-128. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: savasco@usp.br
Foi investigado o valor diagnóstico da resposta alérgica cutânea em leitões experimentalmente sensibilizados, pela via intramuscular, com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados pelo calor. Foram utilizados 91 animais, divididos em quatro grupos: grupos A e B, cada um com 25 indivíduos, grupos C e D com 21 e 20 indivíduos respectivamente, balanceando-se as características de raça, linhagem, faixa etária e sexo. Aos 30 dias de idade, todos os animais foram submetidos a uma triagem com a aplicação de tuberculina PPD bovina, pela via intradérmica na base da orelha e não houve qualquer tipo de reação. Decorridos 60 dias do teste tuberculínico de triagem, o grupo A recebeu injeção intramuscular de 0,5 mL de uma suspensão oleosa de M. avium estirpe D4; o grupo B recebeu 0,5 mL de uma suspensão oleosa de M. bovis estirpe AN5; o grupo C (controle I), recebeu 0,5 mL do adjuvante oleoso; e o grupo D (controle II), recebeu 0,5 mL de solução fisiológica. Após 30 dias da sensibilização foi realizada a prova de tuberculinização comparativa com reação medida pela variação da espessura da pele com cutímetro de mola às 0h, 24h, 48h e 72h, após a aplicação das tuberculinas. No teste comparativo, lido às 48 ou 72 horas, a reação foi considerada negativa quando a diferença das reações entre o PPD bovino e o PPD aviário foi menor que 6,7 mm; suspeito ou inconclusivo quando a diferença se situou na faixa de 6,7 a 7,5 mm; e positiva de acordo com o tipo de PPD, considerando-se tuberculose para PPD M. bovis e micobacteriose para PPD M. avium, quando a diferença da reação foi superior a 7,5 mm.
#3 - Parameter estimation and use of gamma interferon assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Brazil, 32(4):279-283
Abstract in English:
ABSTRACT.- Lopes L.B., Alves T.M., Stynen A.P.R., Mota P.M.P.C., Leite R.C. & Lage A.P. 2012. Parameter estimation and use of gamma interferon assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(4):279-283. Embrapa Agrossilvipastoril, Rodovia MT 222, km 2,5, Caixa Postal 343, Sinop, MT 78.550-970, Brazil. E-mail: luciano.lopes@embrapa.br
This study aimed to evaluate the interference of tuberculin test on the gamma-interferon (INFg) assay, to estimate the sensitivity and specificity of the INFg assay in Brazilian conditions, and to simulate multiple testing using the comparative tuberculin test and the INFg assay. Three hundred-fifty cattle from two TB-free and two TB-infected herds were submitted to the comparative tuberculin test and the INFg assay. The comparative tuberculin test was performed using avian and bovine PPD. The INFg assay was performed by the Bovigam™ kit (CSL Veterinary, Australia), according to the manufacturer’s specifications. Sensitivity and specificity of the INFg assay were assessed by a Bayesian latent class model. These diagnostic parameters were also estimate for multiple testing. The results of INFg assay on D0 and D3 after the comparative tuberculin test were compared by the McNemar’s test and kappa statistics. Results of mean optical density from INFg assay on both days were similar. Sensitivity and specificity of the INFg assay showed results varying (95% confidence intervals) from 72 to 100% and 74 to 100% respectively. Sensitivity of parallel testing was over 97.5%, while specificity of serial testing was over 99.7%. The INFg assay proved to be a very useful diagnostic method.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Lopes L.B., Alves T.M., Stynen A.P.R., Mota P.M.P.C., Leite R.C. & Lage A.P. 2012. Parameter estimation and use of gamma interferon assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(4):279-283. Embrapa Agrossilvipastoril, Rodovia MT 222, km 2,5, Caixa Postal 343, Sinop, MT 78.550-970, Brazil. E-mail: luciano.lopes@embrapa.br
O presente estudo avalia a interferência do teste de tuberculinização no teste do interferon gama (INFg), estima a sensibilidade e a especificidade do INFg em condições brasileiras e simula a utilização dos testes múltiplos usando a tuberculinização comparada e o teste do INFg. Trezentos e cinquenta animais oriundos de dois rebanhos livres e dois rebanhos positivos foram submetidos à tuberculinização comparada e ao teste de INFg. A tuberculinização comparada foi realizada utilizando PPD aviária e bovina. O teste de INFg foi realizado utilizando o kit Bovigam® (CSL Veterinary, Austrália) de acordo com as especificações do fabricante. A sensibilidade e especificidade do teste de INFg foram calculadas pelo Modelo Bayesiano de Classe Latente. Esses parâmetros foram também estimados para os testes múltiplos. Os resultados do teste de INFg no D0 e D3 após o teste de tuberculinização foram comparados pelos testes estatísticos de McNemar e kappa. Os resultados das médias de densidade ótica do teste de INFg em ambos os dias foram similares. A sensibilidade e a especificidade do teste de INFg apresentaram resultados variando (95% intervalo de confiança) de 72 a 100% e 74 a 100%, respectivamente. A sensibilidade do teste em paralelo foi acima de 97,5% enquanto a especificidade do teste em série foi acima de 99,7%. O teste do INFg provou ser um método de diagnóstico muito útil.
#4 - Comparison of the allergic diagnosis of bovine tuberculosis using the comparative and Stormont tests
Abstract in English:
The comparison of the comparative tuberculin test and the Stormont method, performed at the sarne groups of animals, gave highly convergent results in bovines free from tuberculosis and also in infected groups with strong reactors. In weak reactors the results were highly discordant. A group of 21 bovines with negative results at the comparative tuberculin test, but reacting to avian tuberculin, was negative with the Stormont test. Twenty six bovines which reacted strongly positive (4.0mm or more) at the comparative test, with or without non-specific reactions, showed also positive reactions in 88.4%, suspicious reactions in 7.7% and negative reactions in 3.9% at the Stormont test. A group of 19 bovines, initially tested by the Stormont method and considered as infected, when retested by the comparative test after 90 days, showed 84.2% positive reactors and 15.7% negative ones. Groups of bovines with suspicious (2.0 to 2.9mm) or weakly positive reactions (3.0 to 3.9 mm) at the comparative test, showed 20.0% positive, 20.0% suspicious and 60.0% negative reactors in the suspicious group and 53.3% positive, 13.3% suspicious and 33.3% negative reactions in the weakly positive reactors by the Stormont test. Another group of bovines gave suspicious reactions when initially tested by the Stormont method, but showed 50.0% positive, 9.3% suspicious and 40.6 negative reactions when retested by the comparative test. The discordant results of the present and other investigations do not allow to recommend the Stormont test for use in routine procedures for the diagnosis of bovine tuberculosis before a critical evaluation has been made, with slaughter and bacteriological exarnination of reacting animals.
Abstract in Portuguese:
A comparação entre a tuberculinização intradérmica comparada (tuberculina bovina e aviária) e a tuberculinização dupla (com 7 dias de intervalo) conhecida por teste de Stormont, revelou resultados altamente concordantes em grupos de bovinos sem tuberculose e em grupos de animais infectados com fortes reações alérgicas, no entanto, apresentou resultados bem discordantes nos reagentes suspeitos e fracamente positivos em ambos os testes cujas causas não puderam ser esclarecidas por exames necroscópicos e bacteriológicos por razões econômicas. Em um grupo de 21 bovinos com resultados negativos na tuberculização comparada, mas portadores de reações à tuberculina aviária, o teste de Storment revelou também resultados negativos. Em 26 bovinos reagentes positivos no teste comparativo com aumento de espessura da dobra da pele (AEDP) acima de 4,0 mm, com ou sem reações inespecíficas, o teste de Stormont acusou também 88,4% de reações positivas, 7,7% reações suspeitas e 3,9% reações negativas. Em outro experimento, um grupo de 19 bovinos reagentes positivos no teste de Stormont, quando retestado, 90 dias depois pelo teste comparativo, este revelou 84,2% de reagentes positivos e 15,7% de reações negativas. Em grupos de bovinos com reações suspeitas (AEDPs entre 2,0 e 2,9 mm) ou fracamente positivos (AEDPs entre 3,0 e 3,9mm) no teste comparativo, o teste de Stormont revelou 20,0% de reações positivas, 20,0% de reações suspeitas e 60,0% negativas, e 53,3% positivas, 13,3% suspeitas e 33,3% negativas respectivamente. Num grupo de bovinos que no teste de Stormont acusou reações suspeitas e que, 90 dias após foi retestado pela tuberculização comparativa, esta acusou 50,0% de reagentes positivos, 9,3% suspeitos e 40,6% negativos. Os resultados discordantes da presente pesquisa e da de outras não recomendam o uso rotineiro do teste de Stormont no diagnóstico da tuberculose bovina antes de uma avaliação científica criteriosa, com abate e exames bacteriológicos de animais reagentes.
