PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Machado L.C., Oliveira V.C., Paraventi M.D., Cardoso R.N.R., Martins D.S. & Ambrósio C.E. 2016. Maintenance of Brazilian Biodiversity by germplasm bank. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(1):62-66. Departamento de Medicina Veterinária, Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Av. Duque de Caxias Norte 225, Pirassununga, SP13635-900, Brazil. E-mail: lucianabiologa@usp.br Currently the importance of using alternative strategies for biodiversity conservation is emphasized and since the establishment of germplasm bank is an alternative to the conservation of endangered species. This is a technique of great importance for the maintenance of Brazilian fauna. Since the early70’sthere was a growing concern about the need to preserve essential genetic resources for food and agriculture, mainly for conservation of genetic material from farm animals. Thus was created the Brasilia Zoo, in July 2010, the first Germplasm Bank of Wild Animals in Latin America, as an alternative strategy for the conservation of threatened or endangered species, using both gametes and somatic cells and stem cells. Then we argue to create new banks or research networks among different regions with aimed to tissue preservation.

• Preservation germoplasm bank cryopreservation preservação banco de germoplasma criopreservação

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Machado L.C., Oliveira V.C., Paraventi M.D., Cardoso R.N.R., Martins D.S. & Ambrósio C.E. 2016. Maintenance of Brazilian Biodiversity by germplasm bank. [Manutenção da Biodiversidade Brasileira através de bancos de germoplasma.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(1):62-66. Departamento de Medicina Veterinária, Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Av. Duque de Caxias Norte 225, Pirassununga, SP13635-900, Brazil. E-mail: lucianabiologa@usp.br Atualmente, a importância do uso de estratégias alternativas para a preservação da biodiversidade é ressaltada e, visto que a criação de bancos de germoplasma é uma alternativa para a conservação de espécies ameaçadas, esta é uma técnica de suma importância para a manutenção da fauna brasileira. Desde o começo da década de 70 houve uma crescente preocupação sobre a necessidade de se preservar recursos genéticos essenciais para alimentação e agricultura, voltados principalmente, para a conservação de material genético de animais de produção. Deste modo, foi criado pelo Jardim Zoológico de Brasília, em julho de 2010, o primeiro Banco de Germoplasma de Animais Selvagens da América Latina, como uma estratégia alternativa para a conservação de espécies ameaçadas ou em perigo de extinção, utilizando tanto gametas como células somáticas e células-tronco. Com isto ponderamos na criação de novos bancos ou redes de pesquisa inter-regionais que foquem nesta preservação tecidual.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Deco-Souza T., Paula T.A.R., Costa D.S., Costa E.P., Barros J.B.G., Araujo G.R. & Carreta-Jr M. 2013. [Comparison between two glycerol concentrations to cryopreservation of semen of mountain lions (Puma concolor).] Comparação entre duas concentrações de glicerol para a criopreservação de sêmen de suçuarana (Puma concolor). Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):512-516. Setor de Patologia Veterinária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 9090, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: tarcizio@ufv.br The development of biotechnologies of reproduction is an important tool for the conservation of wild animals threatened with extinction. Assisted reproduction procedures in mountain lions, however, are scarce, especially those related to sperm cryopreservation. In this context, this study aimed to evaluate the freezing capacity of semen from adult mountain lions in captivity through the comparison of two concentrations of glycerol in the freezing media. Five adult male mountain lions were used, held at the Rehabilitation Center for Wild Animals of Mato Grosso do Sul (CRAS/MS). Samples were collected by electroejaculation and evaluated for physical appearance, volume, sperm progressive status, sperm motility, sperm concentration and sperm motility index. Each ejaculate was spliced into two aliquots and diluted in Tris-citrate-half egg yolk, at final concentrations of 5 and 7.5% glycerol, cooled at a rate of -0.55°C/min and frozen at a rate of -5.8°C/min. Once thawed, the samples were re-evaluated and tested for thermoresistance and hypoosmotic swelling. The suggested protocol for cryopreservation and thawing of semen is efficient in both glycerol concentrations tested, with no difference (p>0.05) between them.

• Mountain lion Puma concolor onça parda sêmen

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Deco-Souza T., Paula T.A.R., Costa D.S., Costa E.P., Barros J.B.G., Araujo G.R. & Carreta-Jr M. 2013. [Comparison between two glycerol concentrations to cryopreservation of semen of mountain lions (Puma concolor).] Comparação entre duas concentrações de glicerol para a criopreservação de sêmen de suçuarana (Puma concolor). Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):512-516. Setor de Patologia Veterinária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 9090, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: tarcizio@ufv.br O desenvolvimento de biotécnicas de reprodução é uma importante ferramenta para a conservação de animais silvestres ameaçados de extinção. Procedimentos de reprodução assistida em suçuarana, no entanto, são escassos na literatura, em especial aqueles relacionados à criopreservação de sêmen. Neste sentido, o presente trabalho objetivou avaliar a congelabilidade do sêmen de suçuaranas adultas mantidas em cativeiro, por meio da comparação entre duas concentrações de glicerol no meio de congelamento. Foram usados cinco machos adultos de suçuarana, mantidos no Centro de Reabilitação de Animais Silvestres do Mato Grosso do Sul (CRAS/MS). As amostras foram coletadas por eletroejaculação e avaliadas quanto ao seu aspecto físico, volume, vigor, motilidade, concentração e índice espermático. De cada ejaculado duas alíquotas foram diluídas em meio Tris-citrato-gema de ovo, em concentrações finais de 5 e 7,5% de glicerol, resfriadas a uma taxa de –0,55°C/min e congeladas a uma taxa de -5,8°C/min. Depois de descongeladas, as amostras foram reavaliadas e submetidas aos testes de termorresistência e hiposmótico. O protocolo de criopreservação e descongelamento de sêmen proposto se mostrou eficiente em ambas as concentrações de glicerol testadas, não havendo diferença (p>0,05) entre estas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ribeiro G., Massoco C.O. & Lacerda Neto J.C. 2012. [Viability of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue–derived stromal vascular fraction after freezing and thawing process.] Viabilidade celular da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos após o processo de congelamento e descongelamento. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(Supl.1):118-124. Departamento de Patologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: cmassoco@usp.br In five adult horses, bone marrow was aspirated from the sternum and adipose tissue extracted from the gluteal region. The samples were processed to obtain the mononuclear fraction of bone marrow and stromal vascular fraction of adipose tissue, and the number of cells obtained and cell viability were determined. Next, the cell samples were frozen in medium containing 20% fetal bovine serum and 10% dimethylsulfoxide. After one month, the cells were thawed and cell viability was again determined. The results revealed that the techniques for collecting both bone marrow and adipose tissue in horses are simple, rapid and safe. The methods used for processing the samples were efficient, yielding about 95% cell viability. After freezing, mean viability of the mononuclear cells of bone marrow was 86%, and 64% for the stromal vascular cells of adipose tissue. In view of the importance of cell therapy in equine clinical medicine, it is concluded that further studies are needed for the standardization of a cryopreservation technique to maintain the integrity for the mononuclear fraction of bone marrow and the stromal vascular fraction of adipose tissue in horses.

• Cryopreservation bone marrow equidae criopreservação equideos medula óssea

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ribeiro G., Massoco C.O. & Lacerda Neto J.C. 2012. [Viability of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue–derived stromal vascular fraction after freezing and thawing process.] Viabilidade celular da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos após o processo de congelamento e descongelamento. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(Supl.1):118-124. Departamento de Patologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: cmassoco@usp.br Cinco cavalos adultos foram submetidos à coleta de medula óssea do esterno e de tecido adiposo da região glútea. As amostras foram processadas para obtenção da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo, o número de células obtidas e a viabilidade celular foram determinados. Em seguida, realizou-se o congelamento das amostras em solução contendo 20% de soro fetal bovino e 10% de dimetilsulfóxido. Depois de um mês, realizou-se o descongelamento das amostras e a viabilidade celular foi novamente mensurada. Os resultados revelaram que as técnicas utilizadas tanto para coleta de medula óssea quanto de tecido adiposo em equinos são simples, rápidas e seguras. As metodologias adotadas para o processamento das amostras foram eficientes, obtendo-se aproximadamente 95% de viabilidade celular. Após o descongelamento, a viabilidade média das amostras de células mononucleares da medula óssea foi de 86% e da fração vascular estromal do tecido adiposo de 64%. Frente à importância da terapia celular na clínica médica de equinos, concluiu-se que é necessária a realização de mais estudos, visando padronizar uma técnica de criopreservação que mantenha a integridade das células da fração mononuclear da medula óssea e da fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Severo C.K., Pereira G.R., Pereira A.M., Ilha G.F., Oliveira J.F.C., Soares M., Arruda R.P. & Gonçalves P.B.D. 2011. Cysteine addition on short-term cooled board semen preservation and its relationship with swine field fertility. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(Supl.1):25-32. Laboratório de Biotecnologia e Reprodução Animal, Departamento de Clínica de Grandes Animais, Hospital Veterinário, Prédio 97, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: bayard@biorep.ufsm.br Artificial insemination is routinely used in the swine industry to reduce the costs of production through to increase the efficiency of the refrigerated boar semen process. The objective of this study was to evaluate the effect of different levels of cysteine (CYS) added to the Beltsville Thawing Solution (BTS) extender semen during cooling for up to 72 hours. Ejaculated from three boars were collected with the gloved-hand technique and semen aliquots were diluted in BTS as follow: BTS only (BTS), BTS + 0.1mM cysteine (CYS0.1), BTS + 0.5mM cysteine (CYS0.5), BTS + 1.0mM cysteine (CYS1.0), BTS + 2.5mM cysteine (CYS2.5), BTS + 5.0mM cysteine (CYS5.0), BTS + 10.0mM cysteine (CYS10.0), and BTS + 20.0mM cysteine (CYS20.0). Evaluation of sperm integrity were analyzed using 0.5mg/ml propidium iodide (plasma membrane), 100µg/ml isothiocynate-conjugated Pisum sativun agglutinin (acrosomal membrane) and 153µM 5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolyl carbocyanine iodide (mitochondria potential) after semen dilution at specific times (0, 24, 48 and 72 hours). Additionally, we also evaluated the effects of 5.0 mM CYS addition in the BTS extender on the maintenance of sperm quality and their influence on fertility in the swine production. After artificial insemination, animals were evaluated based on the estrous return and the number of piglet’s born. Cysteine at concentrations of 10.0 and 20.0mM resulted in more pronounced reductions even at the time zero. Semen viability decreased to levels below 10% at these high levels of CYS in the first 24 hour of storage at 17°C. At the end of the storage time, less than 65% of sperm cells had intact plasma membrane in all groups. The sperm viability decreased significantly when the semen was added at high concentrations of CYS (time “0”; CYS10.0 and CYS20.0; p<0.05), when compared to the other CYS concentrations. The BTS (10.20±0.39) treated group showed a lower rate of estrus return when compared to other (BTSCYS; 86.05±039), and it showed also the highest total number of piglets borne per treatment (12.71±3.38 vs. 9.00±3.38, respectively). In conclusion, the addition of CYS in the BTS semen extender did not maintain spermatic viability of boar cooled spermatozoa and it results in a higher percentage of return to estrus and lower number of piglets borne.

• Cysteine semen preservation swine fertility swine spermatozoa cisteína sêmen suíno fertilidade suína

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Severo C.K., Pereira G.R., Pereira A.M., Ilha G.F., Oliveira J.F.C., Soares M., Arruda R.P. & Gonçalves P.B.D. 2011. Cysteine addition on short-term cooled board semen preservation and its relationship with swine field fertility. [Adição de cisteína na preservação de sêmen suíno refrigerado e sua relação com a fertilidade suína.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(Supl.1):25-32. Laboratório de Biotecnologia e Reprodução Animal, Departamento de Clínica de Grandes Animais, Hospital Veterinário, Prédio 97, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: bayard@biorep.ufsm.br A inseminação artificial é usada rotineiramente na indústria suinícula para reduzir os custos de produção além de obter maior eficiência reprodutiva durante o processo de resfriamento do sêmen. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações de cisteína (CIS) ao diluidor de sêmen Beltsville Thawing Solution (BTS) resfriado sobre a qualidade espermática por até 72 horas. Foram coletados ejaculados de três cachaços e as amostras de sêmen foram diluídas em BTS, conforme os seguintes tratamentos: BTS (grupo controle); CIS0,1 (BTS + 0,1mM de cisteína); CIS0,5 (BTS + 0,5mM de cisteína); CIS1,0 (BTS + 1,0mM de cisteína); CIS2,5 (BTS + 2,5mM de cisteína); CIS5,0 (BTS + 5,0mM de cisteína); CIS10,0 (BTS + 10,0mM de cisteína) e CIS20,0 (BTS + 20,0mM de cisteína). A avaliação da integridade espermática foi determinada através de sondas fluorescentes em uma combinação de 100&#956;g/mL FICT-PSA (isotiocinato de lecitina), 0.5mg/ml PI (iodeto de propidio), e 153&#956;M JC-1 (5,5’,6,6’-tetracloro-1,1’,3,3’-tetraetillbenzimidazolil iodeto de carbocianina). As avaliações dos tratamentos foram realizadas 0, 24, 48 e 72 horas após a diluição do sêmen. Adicionalmente, foi avaliado o efeito da adição de 5,0 mM de cisteína ao diluidor BTS na manutenção da qualidade espermática e no efeito na fertilidade em suínos. Após a inseminação artificial, as fêmeas foram avaliadas quanto a taxa de retorno e o tamanho da leitegada. Durante todos os períodos analizados, os grupos CIS10,0 e CIS20,0 apresentaram menor número de espermatozóides viáveis em relação aos demais grupos. A viabilidade espermática diminuiu a níveis abaixo de 10% nos tratamentos CIS10,0 e CIS20,0 nas primeiras 24 horas de armazenamento a 17ºC. Ao final do período de armazenamento todos os grupos apresentavam média inferior a 65% de espermatozóides com a membrana plasmática intacta. A viabilidade espermática diminuiu significativamente quando altas concentrações de CIS (hora “0”; CIS10,0 e CIS20,0; p<0.05) foram adicionadas ao sêmen comparadas com as demais concentrações. O grupo BTS (10,20±0,39) apresentou menor taxa de retorno ao estro comparado com BTSCIS (86,05±0,39), além de apresentar maior número de leitões nascidos (12,71±3,38 vs. 9,00±3,38, respectivamente). Portanto, podemos concluir que a adição de CIS ao diluidor BTS não mantém a qualidade espermática e resulta em maior taxa de retorno ao estro e menor número de leitões nascidos.